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- 定量磷酸化蛋白质组分析（iTRAQ/label-free）
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- 2026年01月02日
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- 服务名称：
定量磷酸化蛋白质组分析
- 提供商：
中科新生命
产品定义
蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰，它与信号传导、细胞周期、生长发育以及癌症机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。
将磷酸化肽段TiO2富集技术和iTRAQ技术相结合，实现对磷酸化蛋白质组学的定量研究。
技术原理
在磷酸化肽段富集前先进行iTRAQ标记，然后通过TiO2富集方法获得高纯度的磷酸化肽段，最后结合高分辨率质谱完成对样品的定量分析。（可详见iTRAQ和蛋白质修饰位点定性分析部分的技术原理介绍）
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive AB Sciex TripleTOFTM 5600
技术优势
◆ iTRAQ方法分为4-plex和8-plex两种，可配合科研课题灵活应用；
◆ 在磷酸化富集前进行iTRAQ标记，避免TiO2富集的不平行对定量结果的干扰，提高定量磷酸化蛋白质组分析的精确度。
应用领域
◆ 疾病机理研究
◆ 个性化医疗
◆ 农业品种改良
样品要求
| 样品类型 | 样品要求（/组样品） |
| 蛋白质提取物 | 浓度 >1μg/μl，蛋白质总量 >600μg |
| 细胞样品 | 细胞量>107 |
| 组织样品 | 动物、微生物组织湿重>20mg；植物鲜嫩组织>200mg |
| 体液样品 | 血液体积>1ml |
技术参考案例
[1] Nguyen TH, Brechenmacher L, et al. Quantitative phosphoproteomic analysis of soybean root hairs inoculated with Bradyrhizobium japonicum. Mol Cell Proteomics. 2012; 11(11): 1140-55.
[2] Lee DH, Goodarzi AA, et al. Phosphoproteomic analysis reveals that PP4 dephosphorylates KAP-1 impacting the DNA damage response. EMBO J. 2012; 31(10): 2403-15.
[3] Tsigankov P, Gherardini PF, et al. Regulation dynamics of Leishmania differentiation: deconvoluting signals and identifying phosphorylation trends. Mol Cell Proteomics. 2014 Apr 16.
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文献和实验1 背景和意义从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律（特别是疾病防治和病理研究）已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织或器官中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化的研究，识别功能模块和路径，监控疾病的生物标志物，这些研究都需要对蛋白质进行鉴定和定量。生物质谱技术的出现和不断成熟为蛋白质差异表达分析提供了更可靠、动态范围更广的研究手段。基于质谱技术，科学家们不断开发出新的定量蛋白质组学方法，来了解细胞、组织或生物
本节课程介绍了label-free定量蛋白质组学技术的原理及应用。主要包括：（1）以MS数据为例，系统介绍label-free技术进行蛋白质定量的技术流程和原理。（2）介绍免费的label-free分析套件—Maxquant和Perseus。（3）以免疫沉淀（IP）数据为例，展示label-free进行蛋白质互作定量的应用。（4）以数据为例，展示label-free在外泌体蛋白定量分析中的应用。
本节课重点介绍磷酸化修饰位点的蛋白激酶预测、GSEA 方法、 iKAP方法等知识点。
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