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上海善然生物科技有限公司
蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。
本产品于 +2°C 到 +8°C储存.
推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
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文献和实验【讨论】FISH中如何去除宫颈癌中的角化蛋白以更好暴露核酸。
的蛋白酶K(Merck) 37度消化7分钟(请自己按实际情况选择浓度和时间,消化完后用DAPI复染看细胞核有没有被损伤,不要急着上探针杂交),然后用2X SSC洗两遍,梯度乙醇脱水后上探针。 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming
实验试剂 1. 蛋白酶K[美国Merck公司] 2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司] 3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司] 4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司] 5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDTA)[美国Amresco公司] 6. 电泳缓冲液TBE:浓贮存液5×TBE:54.0 g Tris碱,57.1 g硼酸,20 ml
材料和试剂 1. 蛋白酶K(罗氏03115836001) 2. 1M的Tris,pH值8.3 3. 氯化钾 4. 吐温20(10%,EMD4 biosciences,655207) 5.
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