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- 2025年07月16日
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PBSpowder
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上海古朵生物科技有限公司
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
1.FSC = 细胞体积大小 FSC（Forward Scatter，前向散射光），细胞散射光涉及光的折射、反射和衍射，是一个光学测量值。对FSC 影响最大的是细胞内部和外部折射率之间的差异，所以 FSC 可以辅助判断细胞的大小。但是细胞核质比、细胞颗粒的数量和类型以及细胞表面形状等因素也会影响细胞散射光。因此，不要总是认为较大的 FSC 一定等于较大的细胞体积。 2.细胞固定用的是 1％ 多聚甲醛（PFA） 多聚甲醛（PFA）是不溶于水的白色粉末，而在使用前我们需要将其配置成溶液：通过加热
细胞可以省略该步骤。 2） 将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃下以1000×g离心5分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次。 3） 加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。在6孔培养板（约1×106个细胞）中，每个孔加入150-250μL的PBS来重悬细胞。 4） 使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可以使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞。 5） 2-8℃下以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集
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