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10xTBEpowder
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上海古朵生物科技有限公司
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文献和实验苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。 3、器具 (1)电泳系统 (2)紫外透视仪 四、操作步骤 1、 将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍,晾干备用。 2、 制胶: 称取0.5g琼脂糖粉末,加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中,加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶,插好梳子,水平放置待凝固后使用。 3、 加样: 在一个洁净的小离心
和运行时可作为样品的pH 指示剂(图 3A)。常用染料包括溴酚蓝、二甲苯青、苯酚红、和橙色 G。选择上样缓冲液时,需注意染料的表面迁移(s)(图 3B, 表 5 和 6)以避免遮盖目的核酸条带,特别是分子大小接近时(图 3C)。染料遮盖会影响目的条带的分析和量化,导致结果不可靠。 图 3. 中性pH中染料颜色。(B)在 TAE 和 TBE 缓冲液中不同百分比琼脂糖里的染料迁移。(C)在可视化过程中染料阴影遮盖条带。 3. 运行电泳 在凝胶、标准品和样品制备后,进行电泳。拆卸梳子和添加电泳缓冲液
即水饱和的溴酚蓝液。在15ml灭菌离心管中,依次加入以下各种成分:4.0ml 10 × FA buffer3.1ml 甲酰胺2.0ml 100%的甘油720ul 37%的甲醛80ul0.5M的 EDTA (PH 8.0)16ul 水饱和的溴酚蓝100ul DEPC水混匀,分装,-20℃保存,常用放4℃保存。5、1×甲醛变性胶电泳缓冲液(1×running buffer):20 ml 10×FA gel buffer,4.0 ml 37%的甲醛,176 ml水,放入电泳槽中使用,一般在3次电泳结束后需
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