TeloPrime Full-Length cDNA Amp

TeloPrime 全长cDNA扩增试剂盒包含了从total RNA起始到扩增全长cDNA的全部流程。
全长cDNA合成
基于Lexogen特有的依赖帽子结构的接头连接（Cap-Dependent Linker Ligation）和长反转录技术（Long RT），对于同时具有帽子结构和PolyA结构的全长RNA分子具有高度的选择性。

可有效去除降解的RNA
基于依赖帽子结构的接头连接（Cap-Dependent Linker Ligation）技术，5’linker和cDNA3’末端的连接方式由一种高度的依赖于帽子结构的方式所替代，从而提供一种帽子结构特异性，并且去除了降解没RNA的cDNA产物。再一次mRNA测序的试验中，使用TeloPrime，Template-Switch（TS）或Oligo Capping（OC）标记了没RNA的5’末端。转录起始位点（TSS）比对到小鼠的基因组上。累积的TSS reads覆盖度通过规范化注释过的转录本长度进行作图，显示出对于top500的表达基因的TSS比对情况。

更多的下游应用
全长cDNA产物可以用于多种下游研究，例如NGS，RACE，克隆，芯片探针，和均一化。这个方法能够发现和正确定量剪切变化，以及正确的转录起始位点和终止位点，不论长的还是短的mRNA分子。对于进一步全长或者是基因特异性的PCR反应，Lexogen提供了TeloPrime PCR Add-on Kit（Cat. No 018.30），包括30个反应。这个试剂盒包括单独提供PCR正向和反向引物，因此你可以选择性的替换成感兴趣的基因特异性引物。



TeloPrime Workflow
TeloPrime全长cDNA扩增试剂盒是一款由totalRNA其实用于扩增全长cDNA的试剂盒。基于Lexogen特有的依赖帽子结构的接头连接（Cap-Dependent Linker Ligation）和长反转录技术（Long RT），对于同时具有帽子结构和PolyA结构的全长RNA分子具有高度的选择性。

合成全长cDNA的第一步，第一条cDNA链的合成是由Oligo dT引物的long RT开始。这一步迅速的将全部的RNA序列信息保护起来，以利于帽子选择步骤的实施。另外一个更加稳定的RNA：cDNA混合物通过后RT纯化维持稳定。

这个双链的RNA：cDNA混合物对于接下来的 Cap-Dependent Linker Ligation反应同样非常重要。带有5’C overhang末端的双链引物与带有反向G帽子结构的的非典型碱基对配对。通过使用双链特异性链接，这个链接反应只会替换掉有帽子结构的序列，并且RT真的达到了mRNA的5’末端。没有帽子结构，链接将不会发生。例如：降解的RNA（低RIN），或者由于二级结构RT过早的终止。因此，5’接头标签到cDNA 3’末端的连接反应被替换成了一个高度依赖与帽子结构的方法。

在接下来的第二链合成和纯化步骤消除所有的残留背景，并且只有5’被标记的全长cDNA可以转化成全长的双链（ds）cDNA。

全长ds cDNA接下来进行整体扩增，使用5’和3’标签特异性引物，可以产生足够的产物，用于下游应用，例如：测序，RACE，cloning，和文库或探针生产。

最后扩增产物的定量和质控徐璈应用标准的方法。