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- 详细信息
- 文献和实验
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大量
- 供应商：
上海研卉生物科技有限公司
- 英文名：
Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-3 (CCL23), T7 Tag
- 规格：
5,000 units
相关产品
T7 RNA 聚合酶
SP6 RNA 聚合酶
#M0207L 10,000 units ¥2,789
特性
合成 RNA 反义链，调控基因表达
概述
T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体，可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中，以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性，可进行准确剪切。实验证实，用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定，因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。
来源
SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株，该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株，该菌株携带可表达T3 基因载体。
反应条件
1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HCl（pH 7.9），6 mM MgCl2， 2 mM 亚精胺，1 mM DTT］。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP（不随酶提供）和带有启动子的模板 DNA，在 37 ℃ 温育。
质保声明
无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。
单位定义
1 单位指在 37℃ 条件下， 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
浓度
T3 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；T7 RNA 聚合酶：50,000 units/ml；SP6 RNA 聚合酶：20,000 units/ml。
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文献和实验一般是指 DNA依存性 RNA聚合酶。是催化以 DNA为模板（ template）、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成 RNA的酶。因为在细胞内与基因 DNA的遗传信息转录为 RNA有关，所以也称转录酶。反应以下式示： n1 -n4 表示各个模板的 DNA链的胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘧啶、腺嘌呤的碱基数。通过特异的碱基配对的形成，合成具有与模板 DNA链完全互补的碱基排列的 RNA。反应是由（ 1） DNA与酶的结合
，则可计算其直径约为100A，即约为双链DNA的30bp节段的长度。然而全酶可结合约60个核苷酸 ，提示其形状应为椭圆球形。 结构 为什么细菌 的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多，仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明，噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌体T3和T7的RNA聚合酶分子很相似
mRNA Amplification with T7 RNA Polymerase
on a 42ºC oven and set PCR machine to hold at 70ºC. In an Eppendorf tube add: 1 µg Total RNA 1 µL T7 oligo(dT) primer q.s. to 12 µL with Nuclease-free H2 O Incubate 10 min. at 70ºC. Spin briefly to pull
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