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cAMP依赖性蛋白激酶 (PKA)，催化亚基 cAMP-de

pendent Protein Kinase (PKA), catalytic subunit
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      cAMP-dependent Protein Kinase (PKA), catalytic subunit

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    概述
    PKA催化亚基是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在无cAMP存在时，将与其调控亚基形成无活性PKA全酶(1)。由于本产品是一个独立的催化亚基，因此，不需要cAMP来使其活化。本产品是几种自然存在的PKA催化亚基中的一种。
    从哺乳动物组织中纯化的PKA，在其催化亚基的T197位点处常被磷酸化，这是催化反应所必须的。很有可能是体内存在某种异源激酶将PKA磷酸化。虽然从大肠杆菌中表达的具有完全活性的PKA在其T197和S338位点被自磷酸化，但这并不代表在真核细胞中会使用同样的作用机制(1)。
    影响识别因素
    PKA磷酸化作用的识别功能域为RRXS/TY,其中Y常为疏水残基。若相邻序列为苯丙氨酸(Phe)，则会对PKA磷酸化产生负向影响。另外，也可识别一些含有间隔或碱性残基的变异系列(2)。
    来源
    重组E. coli菌株，携带有小鼠PKA催化亚基(α亚型)克隆。该基因受控于T7表达系统(2，3)(Dr. G. S. McKnight惠赠cDNA)。
    反应条件
    1X PKA 反应缓冲液
    [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C), 10 mM MgCl2]    。加入200 μM ATP 和终比活性为100–500 μCi/μmol 的γ-放射性标记的ATP ，30°C温育。
    反应缓冲液(随酶提供)
    10X PKA反应缓冲液
    比活性
    ~5,000,000 units/mg。
    分子量:
    38 kDa。
    质保声明
    无蛋白酶和磷酸酶活性。
    单位定义
    1单位指25 μl反应体系中，30°C条件下，1分钟内催化1 pmol 磷酸转移至底物Kemptide, LRRASLG (100 μM, NEB #P6001)上所需PKA催化亚基的酶量。
    浓度
    2,500,000 units/ml。
    保存条件
    50 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl (pH 7.5 @25°C), 1 mM Na2EDTA, 2 mM DTT和50%甘油。保存于-20°C。
    热失活
    65°C 20分钟。
    参考文献
    (1) Moore, M.J. et al. (2002) J. Biol. Chem., 277, 47878–47884.
    (2) Zetterqvist, O.Z. et al. (1990)     in Peptides and Protein Phosphorylation (B.E. Kemp, ed), pp. 171–187, CRC Press, Inc., Boca Raton.
    (3) Uhler, M.D., et al. (1986)     Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 1300–1304.
    (4) Slice, L.W., and Taylor, S.S. (1989)     J. Biol. Chem., 264, 20940–20946.

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