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- 服务名称:
吉满生物研发Cas9慢病毒,用于构建稳定表达Cas9蛋白的细胞株。
- 提供商:
吉满生物
- 规格:
询价
Cas9慢病毒服务
Cas9蛋白的CDS区长达4kb,将Cas9基因高效导入细胞是应用Cas9/CRISPR系统进行基因敲除的难点之一,极大地限制可供选择的将基因导入细胞的方法。
结合吉满生物优势,我们研发了慢病毒Cas9表达体系。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白,构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系,再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件。
服务流程:
慢病毒Cas9可选载体:

pGMLV-GM1

pGMLV-GM2

pGMLV-GM3

pGMLV-CA1

pGMLV-CA2

pGMLV-CAGM1

服务说明:
- 客户仅需要提供目的基因ID或定制的gRNA及细胞。
- 吉满生物可提供腺病毒或普通版的Donor载体构建。
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文献和实验【1】SEMA3G-NRP1 Signaling Functions as an Immune Checkpoint that Enables Tumor Immune Evasion by Impairing T Cell Cytotoxicity,中国复旦大学,IF=12.5001,Cancer Research
国自然/高分文章利器!CRISPR文库筛选保姆级指南:从Cas9递送到表型选择一文打通!
, Huang XY, Cai JB, Zhang PF, Cui YH, Ke AW. Current applications and future perspective of CRISPR/Cas9 gene editing in cancer. Mol Cancer. 2022 Feb 21;21(1):57. doi: 10.1186/s12943-022-01518-8. 3. Samuels M, Besta S, Betrán AL, Nia RS, Xie X, Gu X, Shu Q
。 质检托底。 交付细胞无细菌、真菌、支原体污染,克隆形成率 ≥2.5%、倍增时间 <72 小时,冻存复苏复检合格才发货。这些指标看着平淡,实际决定了细胞到手后能不能立刻开展实验。 如果课题需要的是"真正敲干净、基因型明确、可写进论文"的 KO 稳转株,先把目标细胞和基因对着现货库查一遍,查不到再走定制,是性价比最高的路径。 --- 总结 CRISPR KO 稳转株的构建主线: sgRNA 设计与活性验证 →(双载体则先建 Cas9 工具株)→ 编辑与药筛 → 单克隆分选 → PCR测序基因型验证
分为五步,即gRNA文库选择、gRNA文库扩增、gRNA文库慢病毒包装、gRNA文库筛选、PCR扩增和NGS测序 1、gRNA文库选择 首先客户选择所需gRNA文库。如果客户根据具体需要提出文库定制(小于300个基因),我们将根据客户提供的基因群信息进行单个基因的gRNA设计,保证每个基因设计3个不同的gRNA,最大程度确保基因功能的突变。我们采用的载体是单/双慢病毒载体,单慢病毒载体是一个载体上同时携带单个gRNA和cas9基因,双慢病毒载体是一个载体上只有单个gRNA,cas9蛋白则由单独
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