环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书

环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书

CAMP(HY-10153) RIA KIT

一、 药物供应试验

1.BSA 1瓶（用于配制0.2%BSA的醋酸缓冲液）：溶于 15 毫升50mM PH 4.75

的醋酸缓冲液（配法见后）

2.乙酰化剂试剂：使用前将三乙胺和醋酐混匀即可(三乙胺和醋酐各一瓶)

3.¹²⁵I- CAMP1瓶：使用时用50 mM醋酸缓冲液 10 毫升稀释标记品（约2万CPM左右/0.1ml）.

4. CAMP标准1瓶：取 100 微升，用 2.6 毫升50 mM醋酸缓冲液稀释为2pmol/0.1ml，然后倍比稀释成8个浓度点：1、0.5、0.25、0.125、0.062、0.031、0.016、0.008pmol/0.1ml

(B1～B8)。

5. CAMP抗血清一瓶：使用时用含0.2%BSA的醋酸缓冲液13 毫升溶解

6.羊抗兔IgG血清1瓶，每瓶用 10 ml生理盐水溶解即可，4℃保存。

7.正常兔血清1ml，用 10 ml生理盐水溶解即可4℃保存。

8、EDTA抗凝剂1瓶。

9、醋酸缓冲液1瓶： 1：4稀释（1份该液加3份蒸馏水）。

环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书二、操 作

CAMP RIA 加液程序 （单位： ul ）

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试 剂 T NSB B₀ S₁~S8 样 品

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醋醋缓冲液 —— 200 100 —— ——

标 准 品 —— —— —— 100 ——

样 品 —— —— —— —— 100

乙酰化试剂 —— 5 5 5 5

抗 血 清 —— —— 100 100 100

¹²⁵I-CAMP 100 100 100 100 100

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充分混匀，4℃ 过夜。

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正常兔血清 100 100 100 100 100

羊抗兔IgG 100 100 100 100 100

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充分混匀，4℃ 过夜。

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摇匀，室温放置2～3h, 3000rpm离心15分钟，吸去上清，在γ计数器上测定沉淀CPM数。

环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书三、计算

NSB为非特异结合管，标准曲线及样本测得值均需减去NSB值，以B/B0计算标准及待测样品结合百分率，在半对数纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由γ计数器预先编制得程序，直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。或从EXEL表格中的直线回归方法计算。所得结果乘以稀释倍数即可。

四、样品收集

1、需配试剂

1） EDTA抗凝剂。取9.3克EDTA二钠盐加入1mol/L NaOH溶液25ml，溶解后加水到50ml.。

2） 50mMPH4.75醋酸缓冲液，（含4mM EDTA）：取27.22克NaAc . 3H₂0溶于1000ml蒸馏水，即为0.2M NaAc，用冰醋酸配制0.2M醋酸，然后取410毫升0.2M HAC和590毫升0.2M NaAc混匀，测PH值调到PH 4.75，然后每1000毫升溶液加入5.95克 EDTA 二钠盐溶解即可.此溶液为200 Mm pH 4.75 的醋酸缓冲液，EDTA为16mM。使用时将该液1：4稀释。（1份该液加3份蒸馏水）即成50mM pH4.75醋酸缓冲液，含EDTA 4Mm.

环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书2、血样本处理

1） 取静脉血1～2ml，注入含DETA抗凝剂50ul的试管中，摇匀，一小时内离心4℃，2000rpm离心10min，分离血浆， —20℃保存，严禁反复冻融。

2） 血浆处理：取0.1ml血浆加入2ml无水乙醇，振摇1分钟，静置5分钟，3000转/分离心10分钟。将上清液到入指形管或青霉素小瓶，残渣再加入75%乙醇1ml，匀浆，3000rpm离心10分钟。合并上清液，于60℃烤箱中吹干，残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解，然后取0.1ml测量，此时稀释倍数为100。结果×100即为pmol/ml.

3、组织样品处理

取组织50毫克左右放入盛有2ml冷的50mM PH4.75醋酸缓冲液的试管内(冰浴)，匀浆，加入2ml无水乙醇，混匀，静止5分钟，3500转离心15分钟，将上清液收集在青霉素小瓶内，再用75%乙醇2ml洗沉淀，匀浆分散，混匀，3500转离心15分钟。合并上清液,60℃烤箱中吹干，残渣放于4℃保存。测量时用1ml醋酸缓冲液溶解，然后取0.1ml测量。

4、对于血、组织样本，不同血样或组织中的CAMP或CGMP含量不同，测试前最好预实验确定样品稀释度。

五、正常人血浆参考值：

CAMP:23.1±7.7pmol/ml
中文名称：小鼠V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene
中文名称：小鼠鸟氨酸脱羧酶(ODC)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Ornithine Decarboxylase (ODC)
中文名称：小鼠表皮转谷氨酰胺酶(TGM3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Transglutaminase 3, Epidermal (TGM3)
中文名称：小鼠角质转谷氨酰胺酶(TGM1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Transglutaminase 1, Ke英文名称：Ratinocyte (TGM1)
中文名称：小鼠凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Apoptotic Peptidase Activating Factor 1 (APAF1)
中文名称：小鼠多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Pleiotrophin (PTN)
中文名称：小鼠丝切蛋白1(CFL1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1)
中文名称：小鼠粒细胞趋化蛋白2(GCP2)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Granulocyte Chemotactic Protein 2 (GCP2)
中文名称：小鼠二级淋巴组织趋化因子(SLC)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Secondary Lymphoid Tissue Chemokine (SLC)
中文名称：小鼠B-淋巴细胞趋化因子1(BLC1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1)
中文名称：小鼠白介素28A(IL28A)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 28A (IL28A)
中文名称：小鼠白介素17B(IL17B)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 17B (IL17B)
中文名称：小鼠成纤维细胞生长因子10(FGF10)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10)
中文名称：小鼠表皮调节素(EREG)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Epiregulin (EREG)
中文名称：小鼠趋化因子C-C-基元受体1(CCR1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Receptor 1 (CCR1)
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中文名称：小鼠成纤维细胞生长因子18(FGF18)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18)
中文名称：小鼠白介素17F(IL17F)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 17F (IL17F)
中文名称：小鼠成纤维细胞生长因子3(FGF3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 3 (FGF3)
中文名称：小鼠颗粒体蛋白(GRN)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Granulin (GRN)
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中文名称：小鼠生长分化因子5(GDF5)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 5 (GDF5)
中文名称：小鼠生长分化因子1(GDF1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 1 (GDF1)
中文名称：小鼠干扰素诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha
中文名称：小鼠VEGF共调节趋化因子1(VCC1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)
中文名称：小鼠羧肽酶N1(CPN1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Carboxypeptidase N1 (CPN1)