液相色谱仪色谱柱更换需注意哪些问题？

色谱柱作为液相色谱仪分析系统中的分离单元，色谱柱的分离度对于色谱仪检测分析速率的快慢以及检测结果的准确性起着至关重要的作用。影响色谱柱分离度的影响因素有很多，除了色谱柱自身的性能参数外，在使用液相色谱仪色谱柱分析过程中，尤其要注意的是“柱外效应”对分析结果的影响。
那么，什么是“柱外效应”呢？“柱外效应”又是如何造成的？ 所谓“柱外效应”是指除色谱柱自身性能之外造成色谱峰展宽的因素,其主要由进样装置、检测器以及它们与色谱柱之间的连接管路死体积所造成。造成“柱外效应”的原因是样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低 。
为使柱外效应减至最小，使检测结果更加准确，液相色谱仪各装备的管路连接非常重要。一般而言，液相色谱仪的第一次安装都是由色谱仪厂家技术员安装完成的，整个液相色谱仪及其配套装备都是安装的很完美的。客户后期在更换色谱柱要注意的问题是接头的处理，一般柱子入口和出口接头为不锈钢卡套接头，当完成第一次安装后，不锈钢卡套已固定死，因此，早更换色谱柱时应当注意的问题是柱子接头处的形状和长度，否则会产生一个非常大的死体积。
更换液相色谱仪的色谱柱操作方法是：先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子（冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分），关掉流速，待流速降至0后，把柱子两边的PEAK头拧下来，用配套的塞子将换下的柱子两头堵上，密封保存。更换新的色谱柱时，应先将需换上的柱子两边的塞子旋开，确定好柱子标示的方向后，先接柱子入口端，并使柱子出口端略高于入口端，这样就使流动相流过柱子时能将其中的气泡排出，待气泡排尽后，再接上柱子的出口端，用纯的乙腈小流速冲洗半小时，再用流动相按0.2， 0.5， 1.0逐渐加大流速来冲洗。
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