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文献和实验微量离心管 无菌2ul, 20ul, 200ul, 1000ul Tips/ Pipetmans 方法: 此PCR反应是一种nested PCR,包括2阶段PCR反应,1st stage PCR结束后,取其反应物作2nd stage PCR,然后取2nd PCR产物作agarose gel electrophoresis,依DNA band之有无及片段大小来分析结果。 结果:使用UV light观察,并照相记录。 方法: 此PCR反应是一种nested PCR,包括2阶段PCR反应,1st
药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。实验步骤贴壁细胞:1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
自己需要的实验处理,处理结束后开始收蛋白,先用 1×PBS 将细胞洗两次,每次吸尽上清。2、每孔加入 200ul NETN 裂解液,冰上裂解 15min High salt NETN buffer母液配制 100ML20mM Tris,PH=8.01M2ml500mM NACL5M10ml0.5% NP-4020%2.5ml1mM EDTA0.5M200ulH2O85.3ML临用前加蛋白酶抑制剂3、用细胞刮刮细胞,将细胞收集于 1.5mlEP 管中,1500g,4℃,离心 10min4、离心
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