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北京鼎国
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文献和实验分钟。 4) 加15nl(20ml)用冰预冷的溶液Ⅲ。封住瓶口,摇动离心瓶数次以混匀内容物,此时应不再出现分明的两个液相。置冰上放10分钟,应形成一白色絮状沉淀。于0℃放置后所形成的沉淀应包括染色体DNA、高分子量RNA和钾-SDS-蛋白质-膜复合物。 5) 用合适转头于4℃以4000转/分离心15分钟,不开刹车而使转头自然停转。如果细菌碎片贴壁不紧,可以5000转/分再度离心20分钟,然后尽可能将上清全部转到另一瓶中,弃去残留在离心管内的粘稠状液体。未能形成致密沉淀块
【共享】RNA抽提实验注意事项,以及各种RNA的抽体的常用方法及步骤,还有质量鉴定的几种方法
钒核苷复合物。7)加入无RNA酶的胰DNA酶I至终浓度为2μg/ml,混匀,于37℃温育60分钟。8)分别按10mmol/L和0.2%的终浓度加EDTA和SDS。9)用等体积酚:氯仿抽提1次。10)于室温以5000g离心10分钟使水相与有机相分相, 将水相吸至另一个离心管内,加3mol/L乙酸钠(pH5.2)至终浓度为0.3mol/L,加2.5倍体积用冰预次的乙醇,充分混匀,冰浴放置2小时。11)用微量离心机于4℃以12 000g离心5分钟沉淀RNA。12)吸出所有的乙醇,将打开管盖的离心管在实验
7.5)、5mmol/L MgCl2 、1%Triton –X 100],轻轻上下振荡至透明,红细胞 完全溶解。 (3)冰浴10min,离心,3000rpm,10min。弃上清,STMT重复处理1~3次。 (4)弃上清,白色沉淀物加10ml STE[0.1mol/L NaCl、10mmol/l Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA(pH8.0)],先少量,充分混匀,然后加10mg/ml蛋白酶K100μl,20%SDS30μl,摇匀,置37℃水浴15~20h。 (5)用等体积饱和
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