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文献和实验分装。DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。但DTT价格略高一些。DTT粉末的一般保存条件:-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。 由于容易被空气氧化,因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低,随着pH值的降低,DTT的有效还原性也随之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP
培养基配方: (胰)蛋白胨: 10g 酵母提取物: 5g 氯化钠: 5g 琼脂粉: 15g 九、核糖核酸酶A溶液配制 制备不含DNA酶的RnaseA:将胰核糖核酸酶(RnaseA)溶解在0.01mol/L的醋酸钠缓冲液(pH5.2)中,使终浓度为10mg/mL,沸水煮15min,放在室温下,缓慢冷却,用0.1体积的1M Tris-HCl(pH8.0)调整pH至7.4左右,分装小管保存在-20℃备用。 注:当浓缩的溶液
Preparation of nuclear extract and cytoplasmic extract
Solutions:Buffer A (Hypotonic Buffer): 1L10 mM HEPES pH 7.9 10 ml 1M HEPES,pH 7.91.5 mM MgCl2 1.5 ml 1M MgCl210 mM KCl3.33 ml 3M KCl0.5 mM DTT 500 µl 1M DTT0.2 mM PMSF 1 ml 0.2 M PMSFBuffer B (S100 extraction buffer): 500 ml0.3 M HEPES pH 7.9 150 ml
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