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文献和实验%，70%，50%，30%各5min。入PBS（含5mmol/l MgCl 2 ,pH7.3～7.4）10min×2。入0.2n HCl 20min以进一步去除蛋白。 （3）50℃2×SSC，含5mmol/l EDTA溶液中30min。 （4）蛋白酶K（1μg/ml溶于0.1mol/l PBS中，）37℃20～25min。 （5）0.2mol/l 甘氨酸液：室温10min，中止蛋白酶反应。 （6）4%多聚甲醛（PBS新鲜配制）：室温20
以 100～400nt 为宜，过长则杂交效率减低。最近研究结果表明，寡核苷酸探针（16～30nt）能自由出入细菌和组织细胞壁，杂交效率明显高于长探针。因此，寡核苷酸探针和不对称 PCR 标记的小 DNA 探针或体外转录标记的 RNA 探针是组织原位杂交的优选探针。二、液相杂交所参加反应的两条核酸链都游离在溶液中，一种研究最早且操作复合的杂交类型，在过去的 30 年里虽有时被应用，但总不如固相杂交那样普遍。主要缺点是杂交后过量的未杂交探针在溶液中除去较为困难和误差较高。近几年由于杂交检测技术的不断
技术，故不作具体评叙，略交待制备使用原则。本章节主要介绍培养细胞的原位杂交技术。 一、探针的制备原则和选择 探针为RNA或双链、单链DNA，双链探针较单链探针有很多缺点，探针必须变性、复性，降低了探针杂交效率，双链探针在溶液中形成长的链状结构倾向，限制了它的组织穿透能力。适用于基因组DNA杂交。由于原位杂交的探针将与高密度的细胞融合，因此，需要减短探针的长度或增加探针的浓度，但是过高浓度的探针往往会增加非特异性结合，因此每种探针应选择适当的浓度。 探针
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