猫骨髓间充质干细胞

猫骨髓间充质干细胞

质量检测： 沪震生物实验室分离的猫骨髓间充质干细胞经波形蛋白(Vimentin)  免疫荧光染色为阳性，纯 度可达90%以上，且不含有HIV-1、  HBV、  HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

猫骨髓间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用沪震生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。     
二、细胞培养状态 
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法   
在沪震生物技术部标准操作流程下，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。  
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。  
2. 贴壁细胞消化 
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；  
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；  
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；  
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。  
3. 悬浮细胞处理 
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；  
2)1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；
3)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸-管轻轻吹打混匀，37°C温浴2-3min，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞；1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；
5)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
6)待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。     
4. 细胞收货脱落 
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；  
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；  
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；  
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。  
5. 细胞实验 
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。         
四、注意事项 
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。  
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。  
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。  
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和沪震生物技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。   
5. 该细胞只可用于科研。   
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核    
2)本产品未通过用于活体诊断的审核   

备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考