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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
N-MID-OT kit
- 供应商：
上海信裕
人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理：
N-MID-OT试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知N-MID-OT浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将N-MID-OT和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中N-MID-OT的活性浓度呈比例关系。
人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA 检测试剂盒试剂盒内容及其配制
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试剂盒成份（2-8℃保存）
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96孔配置
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48孔配置
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配制
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96/48份酶标板
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1块板（96T）
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半块板（48T）
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即用型
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塑料膜板盖
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1块
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半块
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即用型
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标准品：400ng/ml
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1瓶（0.6ml）
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1瓶（0.3ml）
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按说明书进行稀稀
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空白对照
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1瓶（1.0ml）
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1瓶（0.5ml）
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即用型
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标准品稀释缓冲液
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1瓶（5ml）
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1瓶（2.5ml）
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即用型
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生物素标记的抗N-MID-OT抗体
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1瓶（6ml）
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1瓶（3.0ml）
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即用型
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亲和链酶素-HRP
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1瓶（10ml）
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1瓶（5.0ml）
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即用型
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洗涤缓冲液
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1瓶（20ml）
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1瓶（10ml）
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按说明书进行稀释
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底物A
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1瓶（6.0ml）
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1瓶（3.0ml）
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即用型
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底物B
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1瓶（6.0ml）
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1瓶（3.0ml）
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即用型
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终止液
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1瓶（6.0ml）
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1瓶（3.0ml）
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即用型
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自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA 检测试剂盒试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
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400ng/ml
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（6号标准品）
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原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
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200ng/ml
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（5号标准品）
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100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
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100ng/ml
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（4号标准品）
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100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
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50ng/ml
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（3号标准品）
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100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
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25ng/ml
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（2号标准品）
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100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
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12.5ng/ml
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（1号标准品）
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100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
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0ng/ml
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（空白对照）
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原始浓度不用稀释直接加入50ul。
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2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
结果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的N-MID-OT标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的N-MID-OT含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
xyA546Ra 【中文名称】：大鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Immunoglobulin A (IgA) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA547Ra 【中文名称】：大鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Vascular HZll Adhesion Molecule 1 (VCAM1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA551Ra 【中文名称】：大鼠碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA552Ra 【中文名称】：大鼠组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of MetalloproteinaHZ 1 (TIMP1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA553Ra 【中文名称】：大鼠基质金属蛋白酶9(MMP9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Matrix MetalloproteinaHZ 9 (MMP9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA554Ra 【中文名称】：大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate OxidaHZ 1 (NOX1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA559Ra 【中文名称】：大鼠肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 2, Intestinal (FABP2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA560Ra 【中文名称】：大鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Epidermal Growth Factor (EGF) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA843Ra 【中文名称】：大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA835Ra 【中文名称】：大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Corticotropin Releasing Hormone (CRH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA839Ra 【中文名称】：大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA480Ra 【中文名称】：大鼠肌红蛋白(MYO)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Myoglobin (MYO) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA563Ra 【中文名称】：大鼠白介素1β(IL1β)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Interleukin 1 Beta (IL1b) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA567Ra 【中文名称】：大鼠S100钙结合蛋白B(S100B)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein B (S100B) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA568Ra 【中文名称】：大鼠S100钙结合蛋白A11(S100A11)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A11 (S100A11) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA571Ra 【中文名称】：大鼠Ⅰ型胶原(COL1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Collagen Type I (COL1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA572Ra 【中文名称】：大鼠Ⅱ型胶原(COL2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Collagen Type II (COL2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
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文献和实验相关实验
葡萄糖来源 AGEs ELISA 检测试剂盒 （ Glucose-derived AGEs ELISA Kit ） 研 究 背 景 越来越多的证据指出晚期糖基化终端产物（ AGEs ）修饰蛋白严重影响到老龄化人群的健康问题。 AGEs 是葡萄糖与自由的蛋白质氨基基团发生非酶促糖基化反应的终端不可逆代谢产物的总称。其在人体内的积累会引发组织或器官一系列的病理性变化，从而导致白内障、阿尔茨海默氏病、骨关节炎、心功
(positive)，而是病人（patient）的缩写，不应误解。为避免混淆，更宜用 S/N 表示。在早期的间接法 ELISA 中，有些作者定出 S/N 为阳性标准，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的 S/N 的阈值。更应注意的是，N 所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。因此，这类试剂盒规，如 N (2) 竞争法 在竞争法 ELISA 中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性
质控时使用。 下面再解释一下在ELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写。 （1）S/CO：其中S为Sample(样本)或Specimen(标本)的简写，表示的是标本测定的吸光度值，CO为Cut-off值的简写。除竞争抑制法外，其它ELISA定性测定模式中，当S/CO值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性。 （2）S/N或P/N：其中S同（1），N为Negative(阴性对照)的简写，P为Patient（患者）的简写。较早的试剂盒很多都使用S/N或 P/N≥2.1为阳性
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