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- 上海信裕
- K123003
- 2025年07月13日
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| 别名: | 容量法双组份卡尔费休试剂 ;双组份卡氏试液 |
| 备注: | 需和K123002货号产品搭配使用 |
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文献和实验ml，溴酚蓝0.5g，SDS l0g，溶于水，用HCI调PH至8.0，定容至500ml。( 11)脱色液 甲醇：乙酸：水＝5：1 ：5（体积比）( 12)染色液（0.25%考马斯亮蓝R250）1.00g考马斯亮蓝R250，用脱色液400ml溶解，过滤备用。( 13)低分子质量标准蛋白溶液，包括溶菌酶（MW=14400Da）大豆胰蛋白酶抑制剂（215000）、碳酸酐酶（310000）、卵白蛋白（450000）、牛血清白蛋白 (662000）、磷酸化酶B (925000）。用样品缓冲液配成2mg/ml
液裂解细胞，用移液器适当吹打使细胞脱落，大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解，裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理：先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基，每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min，取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周，-20℃ 可保存约 2 个月，-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定：酶标板，酶标仪、离心机、1 mg/mL
完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析
) 为标准 样品，发现这种方法比被动洗脱的效果好。当凝胶上样量为5jug 时，回收效率分别为： BSA 8 9 % 和 PhosB 5 8 % ^ 被 动 洗 脱 （ 将捻碎的蛋白质条带浸泡在I X 电泳缓冲液过夜） 无法回收到磷酸酶B ，并且只能回收加样的 B S A 的 39 % ( 表 27-1)。在 进 行 MALDITOF M S 之前，将浓缩蛋白质与基质共结晶，进一步去除残留杂质。混合蛋白质溶液 和基质溶液[芥子酸，l 〇 mg/m L 溶于乙腈/水 （3 : 7)]，置
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