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甲状腺素放免试剂盒操作说明书

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  • 2025年07月13日
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      上海信裕

    甲状腺素放免试剂盒操作说明书
    T4（HY-002） RIA KIT
    甲状腺素（T4）又名一四碘甲状腺原氨酸，分子量为777。T4是甲状腺分泌的主要甲状腺激素之一，T4从甲状腺分泌到血循环后99.5%与甲状腺素结合球蛋白（TBG）、甲状腺素结合前蛋白和白蛋白等结合，其作用使激素防止由肾脏排出体外。T4与三种蛋白质结合的百分率，分别为70%、20%、10%，在血循环中只有0.05%的T4为游离状态（FT4）。T4可以经脱碘酶的作用形成生物活性更强的三碘甲状腺原氨酸（T3）。T4主要功能为调节蛋白质及脂肪的代谢，促进生长发育等。血循环中T4的水平受丘脑—垂体—甲状腺轴系统负反馈机制所调节。由于T4绝大部分与TBG等结合，血中总T4水平必然受血中TBG的影响。为了纠正TBG的影响，联合125I-T3的摄取率测定，计算游离T4指数，将获得有意义的结果。甲状腺疾病是内分泌系统常见的疾病，总T4放射免疫测定是研究甲状腺功能最有效最常用的方法之一。
    甲状腺素放免试剂盒操作说明书药盒组成：
    1、 T4标记（红色）1瓶 。
    2、 T4 抗体1（蓝色）瓶。
    3、 分离剂（第二抗体）一瓶。
    4、 T4标准品6瓶。其浓度分别为：0、20、40、80、160、320ng/ml(即:0、25.74、51.48、102.96、205.92、411.84)。
    以上各组试剂均应摇匀使用。
    甲状腺素放免试剂盒操作说明书操作方法：
    1、样品处理：取晨空腹静脉采血，分离血清。（2－8）℃放置可保存7天，若冰冻保存，可放置四周。脂血或溶血样品影响测定结果。
    1、 实验方法：试管编号，按下表程序操作：
    操作表 （ 单位: ul）
    管 别
    标准管
    样品
    抗血清
    蒸馏水
    125I-T4
    混匀，37℃温育1小时，任取三管测总T（CPM）
    分离剂
    NSB管
    50（S0）
    --
    --
    100
    200
    500
    S0管
    50
    --
    100
    --
    200
    500
    S1-S末管
    50
    --
    100
    --
    200
    500
    样品管
    --
    50
    100
    --
    200
    500
    混匀，室温放置15分钟，离心（3500转/分）15分钟，吸弃上清液，测定各管沉淀的放射性计数（CPM）。
    甲状腺素放免试剂盒操作说明书数据处理：
    1、计算机处理：建议函数模型采用三次多项式或log～logit法。
    2、计算、绘图法：
    计算各管的百分结合率：以S0（cpm数）为B0，各标准管Si（cpm数）为Bi，求各管的百分结合率。
    Bi Bi管（cpm）—NSB管（cpm）
    — %= —————————————— ×100
    B0 B0管（cpm）—NSB管（cpm）
    （1）线性回归：用logX～logitY回归，求出r、a、b值，样品含量可由下式计算得出。
    - a+logit Y
    Log X= ————
    b
    （2）绘图法：用各标准点计算的结果，在半对数坐标纸上绘制Bi/B0~logX标准曲线图或在log～logit坐标纸上绘制标准曲线图，未知样品浓度可根据Bi/B0的百分结合率从标准曲线图上查出。
    正常叁考值：
    各实验室应建立自己的正常值，下列正常参考值仅供参考：
    T4（n=150）：50～126 ng/mL (64.30~162 .2nmol / L)
    技术特性：
    1、曲线范围：（20～320）ng/Ml (25.74~411.84nmol / L)
    2、灵敏度： < 3ng/mL(3.86nmol / L)
    3、特异性：T4抗血清与T3的交叉反应合格。
    4、精密度：批内CVw<10%，批间CVb<15%
    5、单位换算：（nmol/L）=(ng/Ml)×1.287
    保存及有效期：
    药盒于（2～8）℃避光保存，切勿冻存。自检定合格之日起有效期为45天。
    药盒参考数据：
    指标
    B/T（%）
    Bi/B0(%)
    项目
    NSB
    S0
    S1
    S末
    参数
    <5
    ≥55
    80
    15
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    • 实验操作篇

      ，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用

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