Human/Mouse/Rat Activin A Valu

Human/Mouse/Rat Activin A Valukine ELISA Kit

人/小鼠/大鼠 Activin A ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL203
适用于定量检测天然和重组人/小鼠/大鼠 Activin A 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
激活素（Activin）和抑制素（Inhibin）是半胱氨酸结细胞因子 TGF-β超家族的成员, 最
初是从性腺液中纯化出来的蛋白质，可分别刺激或抑制垂体释放促卵泡激（follicle
stimulating hormone,FSH）。后来的研究表明，它们参与了广泛的生物过程，包括组
织形态发生和修复、纤维化、炎症、神经发育、造血、生殖系统功能和癌变（1-7）。
Activin 和 Inhibin 是作为前体蛋白产生的。它们的氨基端前肽会被蛋白水解，并促进生
物活性蛋白二硫键二聚体的形成（8-10）。Activins 是由各种β亚基（哺乳动物中为βA、
βB、βC 和βE）组成的非糖基化同源二聚体或异源二聚体，而 Inhibin 则是由一个独特
的α亚基和其中一个β亚基组成的异源二聚体。Activins A 是由两条βA 链组成的同源二
聚体。βA 亚基还可以与βB 或βC 亚基异源二聚，分别形成 Activin AB 和 Activin AC（11,
12）。14 kDa 的成熟人类βA 链与牛、猫、小鼠、猪和大鼠的βA 具有 100%的氨基酸
序列相同性。许多细胞类型都表达βA 链，包括成纤维细胞和角质形成细胞（13），血
管平滑肌细胞（14），上皮细胞和内皮细胞（14, 15），肝细胞（16），破骨细胞和软
骨细胞（17, 18），单核细胞和巨噬细胞（14, 19），神经元（20），卵巢和睾丸的体
细胞（21）以及垂体前叶的促性腺激素（22）。
Activin A 通过与 2 型丝氨酸/苏氨酸 Activin RIIA 激酶结合，然后与 1 型丝氨酸/苏氨酸
激酶 Activin RIB/ALK-4 非共价结合来发挥其生物活性（7, 23, 24）。通过这种受体复
合物发出的信号会导致 Smad 激活并调节 activin-responsive 基因的转录（7, 24）。
Activin A 的生物活性受多种机制调控（24）。BAMBI、TGF-β RIII 和 Cripto 是细胞相
关的分子，它们可作为诱饵受体或限制 Activin A 诱导受体复合物组装的能力（25-27）。
通过将βA 亚基掺入 Activin AC 或 Inhibin A 中，可以来阻止细胞内形成 Activin A（3, 11,
12）。由于 Activin A 与α2-巨球蛋白、Follistatin 和 FLRG 结合成非活性复合物，其生
物利用率受到限制（28-30）。

概述
A. 检测原理
该测定采用3步定量夹心酶联免疫测定技术。抗人/小鼠/大鼠Activin A特异性捕获抗
体被生物素化并结合到链霉亲和素包被的板上。洗板后将检测液、标准品和样品加入孔
中，任何存在的人/小鼠/大鼠Activin A都与固定的抗体结合。洗去未结合物质后，在孔
中加入抗人/小鼠/大鼠βA亚基的特异性辣根过氧化物酶结合物。洗涤去除未结合的酶结
合物后，在孔中加入TMB底物（显色剂），颜色与人/小鼠/大鼠Activin A结合的量成比
例；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本，人/小鼠/大鼠血清样本、人/小鼠/大鼠血浆样本
和人/小鼠/大鼠唾液样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液RD5-54稀释后重新检
测。
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

24
III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测40次，以确定板间精确度。

B. 回收率
在测量范围内，对人类样本中掺入三种不同水平的人/小鼠/大鼠Activin A，测定其回收
率。

C. 灵敏度
对40种检测方法进行了评估，人/小鼠/大鼠Activin A的最小可检测量（MDD）范围为
0.75-7.85 pg/mL。平均MDD为3.67 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。

D. 校正
该免疫测定法以R&D Systems生产的高纯度CHO细胞表达的重组人/小鼠/大鼠Activin
A蛋白校正。
NIBSC/WHO Activin A 第一代参考试剂（91/626），作为效价标准品，在该试剂盒中
进行了评估。该标准的剂量反应曲线与Valukine Activin A标准曲线平行。要将Valukine
人/小鼠/大鼠Activin A分析获得的样品值转换为近似NIBSC 91/626标称值，请使用以下
公式。
NIBSC (91/626)近似值 (mU/mL) = 1.185 × Activin A Valukine检测值 (pg/mL)
E. 线性
为了评估测定的线性，使用含有或掺入高浓度的人/小鼠/大鼠Activin A的人样本，并用
标准品稀释液RD5-54稀释，以产生在测定动态范围内的样本值。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人/小鼠/大鼠Activin A。
将以下蛋白用标准品稀释液RD5-54配制成50 ng/mL的浓度来检测交叉反应。将50
ng/mL的干扰蛋白掺入中值人/小鼠/大鼠Activin A对照品中，来检测对其干扰。没有观察
到明显的交叉反应或干扰。