Human PD-L1/B7-H1 Valukine ELI

Human PD-L1/B7-H1 Valukine ELISA Kit

人 PD-L1/B7-H1 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL117
适用于定量检测天然和重组人 PD-L1/B7-H1 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
程序性死亡因子配体 1(PD-L1)，也被称为 B7- H1 和 CD274，是一种大约 65 kDa 的
跨膜糖蛋白，属于 B7 家族的免疫调节分子(1)。PD-L1 表达于被炎症激活的免疫细胞，包
括巨噬细胞、T 细胞和 B 细胞 (2-5)，角质形成细胞 (6, 7)，内皮细胞和肠道上皮细胞 (6,
8)，以及各种癌细胞和黑色素瘤 (9, 10)。PD-L1 能与 PD-1 和 T 细胞 B7-1/CD80 结合 (5,
6, 10-13)，抑制 T 细胞的活化和增殖 (3, 6, 12, 14)，诱导活化的 T 细胞凋亡 (9)。它通
过促进 T 细胞失活 (5, 12)和调节 T 细胞发育 (14)，在免疫耐受过程中发挥作用。PD-L1
有利于抗炎过程中的 IL-10 和 IL-22 生成树突状细胞的发育 (3, 8)，抑制 Th17 细胞的发
育(14)。在癌症中，PD-L1 能够抵抗 T 细胞介导的裂解，增强上皮细胞向间质转化的能力，
增强 Th22 细胞的致瘤功能 (4, 7, 10, 13)。在癌症患者的血浆和胶质瘤患者的脑脊液中，
其可溶性 PD-L1 会有所升高 (15-20)。它可以被成熟的树突状细胞释放，并保留结合 PD-1
和诱导 T 细胞凋亡的能力 (19, 21, 22)。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 PD-L1/B7-H1 捕获抗体包被于微孔板上，样
品和标准品中的人 PD-L1/B7-H1 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着
加入生物素化的抗人 PD-L1/B7-H1 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入
链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合的试剂后，
加入 TMB 底物溶液（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶
标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清、人血清样本和人血浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 590.7 1596.9 5107.3 596.8 1663.3 5850.1
标准差 18.2 95.1 409.8 18.5 64.7 555.5
CV% 3.1 6.0 8.0 3.1 3.9 9.5
B. 回收率
在不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人PD-L1/B7-H1，测定其回收率。
样本类型 平均回收率（%） 范围（%）
细胞培养上清 (n=4) 97 83 - 107
人血清 (n=5) 117 114 - 119
人血浆 (n=4) 96 85 - 109
C. 灵敏度
人 PD-L1/B7-H1 的最低可测剂量（MDD）一般小于 11.5 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 590.7 1596.9 5107.3 596.8 1663.3 5850.1
标准差 18.2 95.1 409.8 18.5 64.7 555.5
CV% 3.1 6.0 8.0 3.1 3.9 9.5
B. 回收率
在不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人PD-L1/B7-H1，测定其回收率。
样本类型 平均回收率（%） 范围（%）
细胞培养上清 (n=4) 97 83 - 107
人血清 (n=5) 117 114 - 119
人血浆 (n=4) 96 85 - 109
C. 灵敏度
人 PD-L1/B7-H1 的最低可测剂量（MDD）一般小于 11.5 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的 NS0 表达的高纯度重组人 PD-L1/B7-H1 蛋
白所校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人PD-L1/B7-H1，然后用标准品稀释液（1×）将样本
稀释到检测范围内，测定其线性

F. 样本值
人血清样本 - 使用本试剂盒检测了 5 份人血清样本中 PD-L1/B7-H1 的水平。所有样本的
检测值在 392-562 pg/mL 之间，平均值为 486.2 pg/mL。
人血浆样本 - 使用本试剂盒检测了4份人血浆样本中PD-L1/B7-H1的水平。所有样本的检测值
均低于最低标准品，156.3 pg/mL。
G. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 PD-L1/B7-H1 蛋白。将以下因子配制成 100 ng/mL 的浓
度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。。
Recombinant human Other recombinants
B7-1/Fc Chimera Mouse B7-H1 Fc Chimera
B7-2 Fc Chimera Rat B7-1 Fc Chimera
B7-H2 Fc Chimera
B7-H3
B7-H4
B7-H6 Fc Chimera
PD-L2 Fc Chimera
重组人 PD-1/Fc Chimera 没有交叉反应，但当浓度> 50 ng/mL 时有干扰。