Human VEGF R2/KDR Valukine ELI

Human VEGF R2/KDR Valukine ELISA Kit

人 VEGF R2/KDR ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL119
适用于定量检测天然和重组人 VEGF R2/KDR 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
血管内皮生长因子受体 2（VEGF R2）在人体中被称为激酶插入区受体（KDR），在
小鼠中被称为胎儿肝脏激酶-1 受体（Flk-1），是受体酪氨酸激酶 (RTKs) III 类亚家族
成员，此家族还包括 VEGF R1 (Flt-1)和 VEGF R3 (Flt-4)。这三种受体的胞外结构域均
含有 7 个免疫球蛋白样的重复序列，胞内结构域均含有激酶插入区。它们优先表达于血
管内膜或穿透实体肿瘤的增生的内皮细胞 (1)。与 VEGF R1 相比，VEGF R2 更广泛的
分布和表达在所有血管源性内皮细胞中(2)。
VEGF R2 与 VEGF 的结合具有高亲和力 (3)。体外研究进一步证实了 PlGF/VEGF 异二
聚体与可溶性 VEGF R2 具有较高的亲和力，但 PlGF 同型二聚体却不能结合此受体(4)。
与可溶性 VEGF R1 相比，可溶性 VEGF R2 在与表达 VEGF R1 和 VEGF R2 的人内皮
细胞结合方面无法与 VEGF 竞争。可溶性 VEGF R2 只能部分抑制细胞迁移，而可溶性
VEGF R1 几乎可以完全阻断 VEGF 诱导的细胞增殖和迁移(5)。VEGF 与可溶性 VEGF
R2 而非 VEGFR1 结合也依赖于肝素(5)。
VEGF/VEGF R2 信号通路在肿瘤血管生成及其它涉及“病理性血管生成”的疾病中发
挥重要作用。通过阻断抗体致使 VEGF R2 失活从而破坏血管生成，也能阻止肿瘤细胞
侵袭(6,7)。HIV-1 Tat 蛋白是通过 VEGF R2 作用于血管内皮细胞来诱导血管生成的(8)。
Tat 蛋白能特异性结合并激活 VEGF R2。Tat 蛋白诱导的血管生成能够被阻断 VEGF R2
的药物所阻断(8, 9)。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 VEGF R2 捕获抗体包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的人 VEGF R2 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着
加入生物素化的抗人 VEGF R2 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链
霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤后，加入 TMB 底物溶液
（显色剂），避光显色。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测
定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 113.5 218.9 789.8 116.0 223.4 799.5
标准差 3.0 11.8 18.3 5.4 11.1 29.0
CV% 2.7 5.4 2.3 4.6 5.0 3.6
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 VEGF R2，测定其回收率。回收率
范围在 114.2-118.3%，平均回收率在 116.1%。
C. 灵敏度
人 VEGF R2 的最低可测剂量（MDD）一般小于 6.8 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。

D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的 NS0 表达的高纯度重组人 VEGF R2 蛋白
所校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人 VEGF R2，然后用标准品稀释液（1×）将样本稀
释到检测范围内，测定其线性。

F. 样本值
人血清样本 - 使用本试剂盒检测了 10 份人血清样本中人 VEGF R2 的水平。所有样本
的检测值在 7196-12321 pg/mL 之间，平均值为 9279 pg/mL。
G. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 VEGF R2 蛋白。对制备的 50 ng/mL 的下列因素进行
了测定，无交叉反应或干扰。
Recombinant human： Recombinant mouse：
VEGF-D VEGF164
VEGF R3/Fc Chimera
含 25 ng/mL 重组人 VEGF R1/Fc Chimera 的样本检测值为 40 pg/mL（0.16%的交叉
反应）
含 12.5 ng/mL 重组小鼠 VEGF R2/Fc Chimera 的样本检测值为 46 pg/mL（0.36%的交
叉反应）
重组人 VEGF121 和重组小鼠 VEGF120 均无交叉反应，但浓度大于 1.6 ng/mL 时，对实
验有干扰。
重组人 VEGF165 无交叉反应，但浓度大于 3.1 ng/mL 时，对实验有干扰。