Human IL-8 Valukine ELISA Kit

Human IL-8 Valukine ELISA Kit

人 IL-8/CXCL8 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL103
适用于定量检测天然和重组人白介素 8（IL-8）浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
白细胞介素-8（IL-8，也称GCP-1、NAP-1和CXCL8）是属于α型或CXC家族的8-9kDa
的趋化因子，可与肝素结合。目前为止，共发现了15种人的CXC家族蛋白，大小在8-12 kDa
之间。绝大多数位于人类4号染色体，都具有典型的三β折叠层/一个α螺旋结构，多数在N
端显示 Glu-Leu-Arg三肽基序（1-3）。人IL-8先合成为一个99氨基酸前体，其中包含一
个20氨基酸的信号序列，和一个79个氨基酸的成熟区域（4-6）。它可作为单体、同源二
聚体、及与CXCL4/PF4 形成的异源二聚体在体内循环。IL-8单体被认为是最具有生物活
性的，而异源二聚体可能会增强PF4的活性（7-10）。在氨基酸水平，成熟的人IL-8与猪
和犬分别有65%和70%的同源性（11, 12）。在啮齿动物中，IL-8的相应基因尚未发现。
通过选择性剪接和差别蛋白水解产生了多种 IL-8亚型。选择性剪接发生在C-端，那里有
一个11个氨基酸替代（位置在aa #92-99）（13）。蛋白酶水解作用可能是一个细胞的特
定事件，它在IL-8的N-端产生截断。例如，成纤维细胞和血管内皮细胞将第21和第22氨基
酸切断，形成IL-8（1-7），而单体细胞和淋巴细胞在第21-25氨基酸切割，产生IL-8（6, 7）。
这些短式IL-8一般来说具有更高的生物活性，尤其是针对CXCR1 IL-8受体的活性增高（6,
14）。大约15%的IL-8在前体Arg27位发生了瓜氨酸化，这可提高IL-8的半衰期和促使白
血球增多（15, 16）。很多类型的细胞都分泌IL-8，其中包括单核细胞和中性粒细胞（17）、
成纤维细胞和角质形成细胞（18）、肥大细胞（19）、内脏平滑肌细胞（20）、树突状
细胞（21）、II型大肺泡细胞（22）和内皮细胞（23）。
IL-8受体有两个，都属于G蛋白耦联受体蛋白：CXCR1/IL-8RA和CXCR2/IL-8RB，二
者之间的氨基酸序列享有77%同源性（24）。CXCR1分子量为45-50kDa，几乎完全由IL-8
独享；CXCR2分子量为35-40kDa，由所有的CXC趋化因子所共有（25, 26）。
CXCR1和CXCR2分别形成组成型同源二聚体，这似乎是它们的功能性构型。当同一
个细胞表达时，异源二聚体也会形成；但当它与IL-8结合后便会被解体（27）。CXCR2
对低浓度IL-8 有响应，且主要与趋化和MMP-9释放有关。与此相反，CXCR1对高浓度IL-8
有响应，并与呼吸爆发及磷脂酶D2的激活有关（26）。因此，在中性粒细胞CXCR2被认
为可引导中性粒细胞迁移到炎症部位，然后引发CXCR1介导的抗菌活性。
IL-8最著名的功能是它在免疫细胞中的促炎作用。从本质上讲，IL-8是由暴露于炎性
刺激因子的多种细胞类型分泌。对于单核细胞/巨噬细胞来说，微生物的暴露引起IL-8的释
放；随后，CXCR2介导的趋化作用将中性粒细胞迁移到抗原攻击的部位，并伴随下一步
抗菌活性的激活及启动。IL-8可增强骨髓M-CSF的作用，从而引起粒细胞的成熟和释放
（14）。IL-8的这两个功能相辅相成。有报道说，IL-8对肿瘤相关的内皮细胞具有血管生
成功能。此时，肿瘤源性的IL-8可以采取一种旁分泌方式激活血管内皮细胞的CXCR1和
CXCR2。CXCR1和CXCR2都与PI3-K/Akt和RasGTP信号通路相关，参与细胞的存活和
增殖。此外，IL-8正调节VEGFR2和 EGFR属于介导细胞生长和迁移的受体络氨酸激酶
（28）。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-8单抗包被于微孔板上，样品和标准品中的
IL-8会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记的抗人IL-8
多抗，与结合在微孔板上的IL-8结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去；TMB底物溶
液，溶液颜色逐渐变成蓝色，加入终止液溶液变黄并且停止变化。用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清、人血清和血浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测20次，以确定板间精确度。

C. 灵敏度
人IL-8的最低可测值一般小于7.8pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人IL-8蛋白所校正。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人IL-8蛋白。将以下因子用稀释液（1×）配制成50ng/mL的
浓度来检测与人IL-8的交叉反应。将50ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组人IL-8对照
品中，来检测对人IL-8的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
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重组人蛋白 重组小鼠蛋白
GROα KC
GROβ MIP-1α
GROγ MIP-1β
I-309
IP-10
MCP-1
MCP-2
MCP-3
MIP-1α
MIP-1β