Human PD-1 Valukine ELISA Kit

Human PD-1 Valukine ELISA Kit

人 PD-1 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL118
适用于定量检测天然和重组人 PD-1 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
程序性死亡-1 受体(PD-1)又称 CD279，是免疫调节受体 CD28 家族的 I 型跨膜蛋白(1)，
该家族的其他成员包括 CD28、CTLA-4、ICOS 和 BTLA(2-5)。其细胞质尾部含有两个酪
氨酸残基，组成了基于酪氨酸的免疫受体抑制结构域(ITIM)和开关结构域(ITSM)，这两个
结构域对介导 PD-1 信号转导非常重要。PD-1 作为一个单体受体，能与其配体 PD-L1
(B7-H1)和 PD-L2 (B7-DC)以 1:1 的比例相互作用(6,7)。PD- 1 在活化的 T 细胞、B 细胞、
单核细胞和树突状细胞中有表达，而 PD- L1 除了在以上细胞中，还在非造血细胞（如肺
内皮细胞和肝细胞等）中都有表达(8,9)。PD-L1 和 PD-1 的结合能够诱导产生共抑制信号，
促使 T 细胞失活、凋亡、功能衰竭(10)。因此，PD-1 和 PD-L1 相互作用是免疫反应阈值
和外周免疫耐受的关键调控因子(11)。通过抗体或基因调控阻断 PD-1 和 PD-L1 的相互作
用可以加速肿瘤的根除，提示了 PD-1 作为癌症免疫治疗靶标的潜力(12,13)。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 PD-1 捕获抗体包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的 PD-1 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物
素化的抗人 PD-1 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的
辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入 TMB 底物溶液
（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清、人血清和血浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用试剂稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 510.0 1350.0 6895.8 493.6 1389.0 6945.4
标准差 35.8 70.3 556.7 37.6 94.5 365.8
CV% 7.0 5.2 8.1 7.6 6.8 5.3
B. 回收率
在不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人PD-1，测定其回收率。回收率范围为
76.6-114.3%，平均回收率为92.9%。
C. 灵敏度
人 PD-1 的最低可测剂量（MDD）一般小于 14.7 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的 NS0 表达的高纯度重组人 PD-1 蛋白所校正。

E. 线性
在不同类型样本中掺入高浓度的人PD-1，然后用试剂稀释液（1×）将样本稀释到检测范围内，
测定其线性。

F. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 PD-1 蛋白。对制备的 100 ng/mL 的下列因素进行了测
定，无交叉反应或干扰。
Recombinant human
B7-H1/Fc Chimera
CD28/Fc Chimera
CTLA-4/Fc Chimera
ICOS/ Fc Chimera
含 50 ng/mL 重组小鼠 PD-1/Fc Chimera 的样本检测值为 724 pg/mL（1.4%的交叉反应）
重组人 PD-L2/Fc Chimera 没有交叉反应，但当浓度> 25 ng/mL 时有干扰。