Human GM-CSF Valukine ELISA Ki

Human GM-CSF Valukine ELISA Kit

人 GM-CSF ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL124
适用于定量检测天然和重组人 GM-CSF 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

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I. 背景
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，也称为 CSF-2, 是一个 30KDa 的多效性细胞
因子，属于共同β亚基(βc)细胞因子家族的成员，该家族也包括 IL-3 和 IL-5。GM-CSFs
由多种活化的免疫细胞、间充质细胞和上皮细胞等分泌，并以多种糖基化单体形式循环
(1,2)。在炎症反应中，它在多种细胞类型中上调，包括脑源性 T 细胞(3-5)、过敏原暴露
的肺内皮细胞(6)和 IgE 激活的肥大细胞(7)。成熟的人 GM-CSF 与小鼠和大鼠 GM-CSF
的氨基酸序列同源性分别为 54%和 63%(8)。
GM-CSF 具有多功能性。它能诱导 CD34+干细胞前体产生单核细胞、中性粒细胞和嗜酸
性粒细胞(9,10)。它可以与 IL-4 或 Flt-3 配体协同作用，诱导髓样和真皮树突状细胞的发
育和维持(10-14)。它还作为中性粒细胞和树突状细胞趋化剂(6,15)。GM-CSF 促进 Th1
和 Th17 细胞介导的自身免疫性炎症以及树突状细胞、小胶质细胞、肺泡巨噬细胞和嗜酸
性粒细胞的炎症激活(3-5,16-20)。此外，它还与 G-CSF 协同促进肿瘤细胞增殖和侵袭(21)。

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 GM-CSF 捕获抗体包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的 GM-CSF 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入
生物素化的抗人 GM-CSF 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和
素标记的辣根过氧化物酶(streptavidin-HRP) 孵育。洗涤后，加入显色底物，避光显色。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用试剂稀释液（1×）或标准品稀释液
（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、
洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
细胞培养上清/血清
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 31.3 123.2 531.9 31.6 123.9 505.6
标准差 1.1 3.4 17.5 1.2 2.9 34.9
CV% 3.5 2.8 3.3 3.9 2.4 6.9
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 GM-CSF，测定其回收率。回收率范
围在 84.3-96.2%，平均回收率在 89.7%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 GM-CSF，测定其回收率。回收率范围在
111.5-118.9%，平均回收率在 116.2%。
C. 灵敏度
人 GM-CSF 的最低可测剂量（MDD）一般小于 3.8 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。

D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人 GM-CSF 蛋白
所校正。

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E. 线性
不同的细胞上清/人血清中掺入高浓度的人 GM-CSF，然后用试剂稀释液（1×）（
用于细
胞上清样本）或标准品稀释剂（1×）（
用于人血清样本）将样本稀释到检测范围内，测
定其线性。
稀释倍数 平均期待值（%） 范围（%）
1:2 105.2% 94.1-113.6%
1:4 106.8% 90.0-119.6%
1:8 101.9% 86.2-116.6%
1:16 107.8% 87.0-119.6%
F. 样本值
使用本试剂盒检测了 5 份人血清样本中 GM-CSF 的水平。5 份样本的检测值均低于人
GM-CSF 最低检测限，15.6pg/mL。
G. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 GM-CSF 蛋白。对制备的 50 ng/mL 的下列因素进行了
测定，无交叉反应或干扰。
重组人蛋白： 其它重组蛋白：
G-CSF 小鼠 GM-CSF
IL-3Rα 大鼠 GM-CSF
IL-5Rα
M-CSF