Mouse Leptin ELISA Kit，Valukin

Mouse Leptin ELISA Kit，Valukine™

产品信息及操作手册
小鼠 Leptin ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL618
适用于定量检测天然和重组小鼠 Leptin 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

18
I. 背景
小鼠瘦素是小鼠肥胖基因的蛋白质产物（1, 2）。缺乏瘦素功能的突变小鼠被发现肥
胖，糖尿病，不育，减少或降低活动，代谢和体温。编码瘦素的cDNA克隆已经从人类、
猿猴、小鼠和大鼠细胞中分离出来。成熟小鼠瘦素与大鼠和人类蛋白质的氨基酸序列的同
源性分别为96%和84%。小鼠瘦素cDNA编码一个167个aa残基的蛋白质，包括一个信号
序列为21aa的残基，和经切割后得到146个aa残基的成熟蛋白。瘦素mRNA的表达已被证
明仅限于脂肪组织和胎盘中（2）。
一个高亲和力的瘦素受体（OB-R）已被克隆，它与gp130、G-CSF受体和LIF受体具
有同源性（3）。OB-R的多种亚型已被鉴定，包括具有信号转导能力的大胞质结构域的长
型受体（OB-RL），和缺乏信号转导能力的短胞质结构域的受体（OB-RS）（4-6）。还
鉴定出一种缺乏跨膜结构域并可能编码受体可溶形式的OB-R转录本（7）。据报道，OB-RL
转录本主要表达在被认为对体重调节很重要的下丘脑区域。OB-RS转录本的表达发现于多
种组织中，包括脉络丛、肺癌、肾癌和原始造血细胞中（2）。OB-R已被证明是由小鼠糖
尿病（db）和大鼠脂肪（fa）基因编码（8）。长期以来，已知db或fa突变的纯合啮齿类
动物表现出几乎与ob/ob小鼠相同的肥胖表型（9）。
在小鼠、大鼠和人的血清或血浆中检测到高瘦素水平（ng/mL）。瘦素的循环水平被
证明是受到各种刺激反应的调节，包括食物摄入、胰岛素、糖皮质激素、细胞因子和生殖
事件（2, 10-14）。血清中大多数瘦素被报道可与多种瘦素结合蛋白结合（15）。

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠Leptin抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的小鼠Leptin会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
小鼠Leptin检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过
氧化物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤未结合试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用试剂稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在不同样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠Leptin，测定其回收率。回收率范围在
85.2-105.7%，平均回收率在96.4%。
C. 灵敏度
小鼠Leptin的最低可测剂量（MDD）一般小于5.35 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的E.coli表达的高纯度重组小鼠Leptin蛋白所校
正。

F. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant mouse Recombinant human
Leptin R Leptin R
人Leptin重组蛋白浓度为50 ng/mL时检测值为94 pg/mL（0.19%交叉反应）。
大鼠Leptin重组蛋白浓度为1.6 ng/mL时检测值为651 pg/mL（42%交叉反应）。