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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 样本:
Cell culture supernatant, serum
- 标记物:
HGF
- 适应物种:
hu
- 应用:
VAL168
- 检测方法:
定量检测天然和重组人 HGF 的浓度
- 检测范围:
125-8000
- 规格:
96t
Human HGF Valukine ELISA Kit
人 HGF ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号:VAL168
适用于定量检测天然和重组人 HGF 的浓度
科研专用,不可用于临床诊断
I. 背景
肝细胞生长因子(HGF),也称为分散因子、肝细胞生成素A和乳腺生长因子,是一
种调节多种细胞类型生长和迁移的多效性糖蛋白。其结构类似于S1肽酶纤溶酶原。HGF
包含一个N-末端PAN/APPLE样结构域、四个Kringle结构域和一个催化失活的丝氨酸蛋白
酶样结构域(1,2)。选择性剪接产生的人类HGF亚型缺乏蛋白酶样结构域和不同数量
的Kringle结构域。HGF作为非活性单链前肽分泌,可作为可溶性分子循环或与细胞外基
质结合(3,4)。在组织损伤部位,前肽在第四个Kringle结构域后被包括HGF激活剂和
uPA在内的丝氨酸蛋白酶切割(4-8)。产生的生物活性HGF由60kDa N端α链和30kDa C
端β链的二硫键连接的异二聚体组成(4、5、9)。HGF的血清水平在广泛的病理现象中
都会升高,包括肝损伤(10、11)、急性肾功能衰竭(12)、心肌梗死(13)、1型糖尿
病(14)、肥胖(15)和癌症(16-23),以及类风湿性关节炎患者的滑液(24)。人
HGF与牛、犬、猫、小鼠和大鼠HGF具有91-94%的氨基酸序列同源性。HGF表现出明显
的物种交叉反应(25)。
HGF通过广泛表达的受体酪氨酸激酶HGF R/c-MET发挥其生物活性(26,27)。该
受体经历N-连接糖基化,然后蛋白水解裂解为50 kDa N-末端α链和145 kDa C-末端β链
(28)。完全的细胞外α链仍然与β链二硫键相连,β链包含剩余的细胞外、跨膜和细胞质
结构域(26、27)。HGF还结合硫酸乙酰肝素蛋白多糖,这些相互作用增强了HGF结合
和激活HGF R的能力(29,30)。在没有配体的情况下,HGF R与多种膜蛋白形成非共
价复合物,包括CD44v6、CD151、EGF R、Fas、Integrin α6/β4、Plexins B1、B2、B3
和MSP R/Ron(31-38)。一种复合物组分的连接可以触发另一种的激活,然后是协同信
号效应(31-38)。一些异聚体复合物的形成是上皮细胞形态发生和肿瘤细胞侵袭的必要
条件(34-36)。HGF R的过度表达和替代形式的产生与许多人类癌症的发生有关(39)。
HGF由成纤维细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞和内皮细胞表达(1)。另一方面,HGF
R的表达主要在上皮细胞上发现,表明HGF以旁分泌方式介导基质细胞和上皮细胞之间的
相互作用(40)。HGF诱导上皮细胞以及多种其他细胞类型的增殖和迁移,包括肝细胞、
软骨细胞、角质形成细胞、黑素细胞和内皮细胞(1)。它对大多数肿瘤细胞作用有丝分
裂,但在某些情况下可以反过来抑制其增殖(39、41、42)。在器官发生、组织修复和
血管生成过程中,HGF通过诱导细胞散射和分支小管发生促进上皮/内皮形态发生(1、25、
43、44)。HGF调节血管生成和上皮细胞运动的能力是其在实体瘤发展中的重要基础(39)。
除了形态发生效应外,HGF还可在多种组织中诱导一系列反应(1)。它支持胰岛细胞的
存活、增殖和胰岛素分泌(45)。在发育过程中和对损伤的反应中,它作为一种神经营
养因子发挥作用(46,47)。它还通过诱导树突状细胞耐受、Treg诱导和Th2偏向来抑制
炎症,同时抑制T细胞活化、IL-17表达和炎性细胞浸润(48-50)
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人HGF抗体包被于微孔板上,样品和标准品中的
人HGF会与固定在板上的抗体结合,游离的成分被洗去;接着加入生物素化的抗人HGF
检测抗体进行孵育,洗涤去除未结合的物质后,加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶
(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合的试剂后,加入TMB底物溶液(显色剂)。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比;加入终止液;用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用,不可用于体外诊断;
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本;
请在试剂盒有效期内使用;
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用;
样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用试剂稀释液(1×)或标准品稀释液-S
(1×)稀释后重新检测;
检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。
III. 优势
A. 精确度
板内精确度(同一板内不同孔间的精确度)
已知浓度的三个样本,在同一板内分别检测20次,以确定板内精确度。
板间精确度(不同板之间的精确度)
已知浓度的三个样本,在不同板中分别检测20次,以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 240.8 981.8 3810.9 250.5 1012.2 3998.7
标准差 11.1 28.1 119.4 17.3 51.7 321.8
CV% 4.6 2.9 3.1 6.9 5.1 8.0
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人HGF,测定其回收率。回收率范围在
95.1-123.1%,平均回收率在112.7%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人HGF,测定其回收率。回收率范围在
114.0-125.9%,平均回收率在121.0%。
C. 灵敏度
人HGF的最低可测量(MDD)一般小于9.18 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的Sf 21表达的高纯度重组人HGF蛋白所校正。
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应,但有干扰。
Recombinant human Recombinant mouse
HGF R HGF R
MSP
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文献和实验有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法:1, TORCH及传染病试剂盒(间接法),见2.2.32, TORCH-IgM捕获法特色:包被抗体,标记抗原原理:3, 细胞因子试剂盒采用的方法路线(ABC-ELISA)原理产品特色:采用ABC法,灵敏度更高,特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的,使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
的原理用于分子诊断方面:TrimGen公司的KRAS Mutation Detection Kit在96孔板里一次能实现7/8个KRAS突变位点的检测。 另外基于相同原理的技术还有PPT-ELISA。这是用来筛截短突变的,相关文章见:1,Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA . 2,An ELISA-based high throughput protein truncation test
R&D Systems Quantikine® 人高分子量脂联素ELISA试剂盒
浆中HMW 脂联素的水平,而不需要对样品进行蛋白水解的预处理。关于脂联素相关产品的更多信息,请访问我们的网站www.RnDSystems.com/Adipocytokines。人HMW 脂联素水平的测定。利用Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30ELISA Kit(货号 DHWAD0),我们分析了来自不同BMI 个体的血清中的HMW 脂联素平均水平,包括低BMI(平均BMI = 19.8 ;N=4),高BMI(平均BMI = 32.8 ;N=4)和超高BMI(平均
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