HumanIL-12/IL-23p40 Valukine E

HumanIL-12/IL-23p40 Valukine ELISA Kit

人 IL-12/IL-23 p40 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL121
适用于定量检测天然和重组人 IL-12/IL-23 p40 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
白细胞介素 12 (IL-12)又称自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)或细胞毒性淋巴细胞成
熟因子(CLMF)，是一种主要由抗原呈递细胞(单核/巨噬细胞、树突状细胞(DC)和 B 淋
巴细胞)产生的多效细胞因子。IL-12 对 T 淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)具有多种作用，
包括刺激细胞毒性、增殖、细胞因子产生和 Th1 亚群发育的能力(1, 2)。
IL-12 是一个二硫键连接的 70 kDa (p70)异二聚糖蛋白，由 40 kDa (p40)亚基和 35
kDa (p35)亚基组成。p40 和 p35 亚基本身不具有 IL- 12 的活性，但 p40 亚基的同源二
聚体已被证明能与 IL-12 受体结合，是一种 IL-12 的拮抗剂(3, 4)。
人 p40 和 p35 的基因分别位于 5 号和 3 号染色体上，并被单独调控(1, 5)。已经发
现 p35 mRNA 的表达几乎是普遍的，但是在只表达 p35 亚基或同时表达 p35 和 p40 亚
基 mRNA 的细胞培养上清中检测不到 p35 亚基的存在 (1)。在同时表达 p35 和 p40 亚
基 mRNA 的细胞中，p40 mRNA 表达水平较高，不与 p35 结合的游离 p40 亚基与异二
聚体 IL-12 p70 共同被分泌(6)。检测到的大部分由各种人类细胞系分泌的游离 p40 亚基
是以单体形式存在的(1)。
IL-23 与 IL-12 同属异二聚体细胞因子家族，均具有 IL-23/IL-12 p40 亚基(7)。IL-23
还包括一个 p19 亚基。具有生物活性的 IL-23 的形成需要 p19 和 p40 亚基在同一细胞
内合成，它主要表达通过活化的 DC 和吞噬细胞 (7)。
类似于 IL-12,IL-23 诱导 T 细胞分泌 IFN-γ和参与对分枝杆菌的 Th1-t 类型的免疫反
应(7)。与 IL-12 不同的是,IL-23 在人类和小鼠中优先刺激记忆 T 细胞而不是幼稚 T 细胞
数量 (7)。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL-12/IL-23 p40 捕获抗体包被于微孔板上，
样品和标准品中的人 IL-12/IL-23 p40 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；
接着加入生物素化的抗人 IL-12/IL-23 p40 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质
后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合
的试剂后，加入 TMB 底物溶液（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入
终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 151.6 720.5 3825.9 149.8 698.4 3578.1
标准差 7.2 35.0 135.9 8.3 31.4 252.3
CV% 4.7 4.9 3.6 5.5 4.5 7.1
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-12/IL-23 p40，测定其回收率。回
收率范围在 82.3-108.1%，平均回收率在 91.6%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-12/IL-23 p40，测定其回收率。回收率
范围在 76.8-103.7%，平均回收率在 87.6%。
C. 灵敏度
人 IL-12/IL-23 p40 的最低可测剂量（MDD）一般小于 17.6 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。

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E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人 IL-12/IL-23 p40，然后用标准品稀释液（1×）将样
本稀释到检测范围内，测定其线性。
稀释倍数 平均值（%） 范围（%）
1:2 96.0 83.0-106.9
1:4 96.9 87.4-112.8
1:8 97.9 86.8-113.2
1:16 99.3 84.5-120.3
F. 样本值
人血清样本 - 使用本试剂盒检测了 5 份人血清样本中 IL-12/IL-23 p40 的水平，所有样
本的检测值均低于人 IL-12/IL-23 p40 最低标准，93.8 pg/mL。

G. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 IL-12/IL-23 p40 蛋白。将以下因子配制成 50 ng/mL
的浓度检测，没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant mouse：
IL-12
IL-12/IL-23 p40
含 5 ng/mL 重组人 IL-12 p70 的样本检测值为 134 pg/mL（2.7%的交叉反应）。
含 3.12 ng/mL 重组人 IL-23 的样本检测值为 93 pg/mL（3.0%的交叉反应）。