Human PDGF-BB Valukine ELISA K

Human PDGF-BB Valukine ELISA Kit

适用于定量检测天然和重组人 PDGF-BB 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

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I. 背景
血小板源生长因子（PDGF）被发现是一种主要的有丝分裂因子，存在于血清中，不
存在于血浆。它被发现是由血小板α-颗粒分泌，并在血液凝固形成血清的过程中被激活。
人PDGF是对一小群结构相关的分泌性生长因子的总称。这些生长因子在体内广泛表达，
由二硫键连接，代表四个不同基因的产物。目前共有5种PDGFs，均属于PDGF/VEGF家
族，即半胱氨酸结蛋白超家族。在PDGF家族中，有两个亚家族以存在或不存在CUB域
(C1r/Cls、Urchin EGF-like和BMP1-1)为特征(1-4)。
人PDGF-BB是一种35 kDa，241个氨基酸的前体蛋白。它包含一个20个氨基酸(aa)
的信号序列，一个61 aa的N-端前体结构域，一个109 aa的成熟区(aa 82-190)和一个51 aa
的C-端前体结构域(5-8)。成熟的人PDGF-B序列与成熟的犬和小鼠PDGF-B分别具有96%
和89%的氨基酸同源性。PDGF-BB通过肝细胞和不可吸收性破骨细胞表达，参与生成成
骨细胞和骨形成(8, 9)。它也由血小板，巨噬细胞和肥大细胞产生，并在损伤部位促进中
性粒细胞和巨噬细胞浸润，以清除创面、促进新ECM的成纤维细胞分泌和IFG-I介导的上
皮细胞再生(10, 11)。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人PDGF-BB抗体包被于微孔板上，样品和标准
品中的人PDGF-BB会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化
的抗人PDGF-BB检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的
辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合试剂后，加入TMB底物溶液（显
色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 50.0 231.2 1049.9 50.3 234.3 1050.4
标准差 3.5 18.0 39.9 3.3 18.8 45.8
CV% 6.9 7.8 3.8 6.6 8.0 4.4
B. 回收率
在细胞上清样本中掺入检测范围内不同水平的人PDGF-BB，测定其回收率。回收率范围
在93.7-127.5%，平均回收率在113.7%。
C. 灵敏度
人PDGF-BB的最低可测剂量（MDD）一般小于0.728 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。

D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的E.coil表达的高纯度重组人PDGF-BB蛋白所校
正。