Human IL-4 Valukine ELISA Kit

Human IL-4 Valukine ELISA Kit

目录号：VAL123
适用于定量检测天然和重组人 IL-4 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
白细胞介素-4 (IL-4)，也被称为 B 细胞刺激因子-1，是一种单体细胞因子，约 13
kDa-18 kDa 的 Th2 细胞因子，在免疫应答过程中表现出多效性作用(1-3)。它是一种含
有 3 个链内二硫键，4α螺旋结构的糖基化多肽(4)。人 IL-4 合成时含有 24 个氨基酸信号
序列。选择性剪接形成内部有缺失 16 个氨基酸的异构体。成熟的人 IL-4 与牛、小鼠和
大鼠 IL-4 的氨基酸序列同源性分别为 55%、39%和 43%。人类、小鼠和大鼠的 IL-4 活
性具有其物种特异性(5-7)。
IL-4 通过两种受体复合物发挥作用(8,9)。I 型受体在造血细胞中表达，是配体结合
IL-4 Rα和共有的γ链(IL-2、-7、-9、-15 和 21 受体的共同亚基)的异二聚体。非造血细
胞表达的 II 型受体由 IL-4 Rα和 IL-13 Rα1 组成。II 型受体也能转导 IL-13 介导的信号。
IL-4 主要由 Th2 极性的 CD4+T 细胞、肥大细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸性粒细胞表达
(1,2)。它促进细胞增殖、存活和人 B 细胞的免疫球蛋白类别转换为 IgG4 和 IgE，通过
初始 CD4+ T 细胞获得 Th2 表型，启动和趋化肥大细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞，以
及增殖和活化上皮细胞(10-13)。IL-4 在过敏性炎症和哮喘的发生中起主导作用(12,14)。
此外，IL-4 在体内和体外均具有抗肿瘤活性(15-17)。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL-4 捕获抗体包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的 IL-4 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物
素化的抗人 IL-4 检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的
辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入 TMB 底物溶
液（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 54.5 201.1 778.7 55.8 208.9 835.0
标准差 2.0 5.8 31.9 2.9 7.9 72.0
CV% 3.7 2.9 4.1 5.2 3.8 8.6
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-4，测定其回收率。回收率范围在
84.0-89.3%，平均回收率在 86.7%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-4，测定其回收率。回收率范围在
94.0-113.5%，平均回收率在 101.4%。

C. 灵敏度
人 IL-4 的最低可测剂量（MDD）一般小于 6.18 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。
D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人 IL-4 蛋白所
校正。