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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
有效期2年
- 英文名:
X-gal
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 库存:
大量
- 保存条件:
-20℃避光保存
- 规格:
1g(10901ES03)/5×1g(10901ES08)
| 规格: | 1g(10901ES03) | 产品价格: | ¥426.00 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5×1g(10901ES08) | 产品价格: | ¥1746.00 |
X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。基于这个特点,当pUC系列载体DNA以lacZ 缺欠细胞作为宿主进行转化时,或M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在培养基中加入X-Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色而方便地挑选择出基因重组体。

常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。
运输与保存方法
冰袋运输。-20 ℃避光保存,有效期2年。
产品性质
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中文名称(Chinese Synonym) |
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 |
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英文名称(English Synonym) |
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside; 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside |
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CAS号(CAS NO.) |
7240-90-6 |
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分子式(Molecular Fomular) |
C14H15BrClNO6 |
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分子量(Molecular Weight) |
408.63 g/mol |
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外观(Appearance) |
白色至浅黄色粉末 |
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纯度(Purity) |
>99% |
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溶解性(Solubility) |
溶于DMSO,溶解度可达20mg/mL。也溶于DMF。 |
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结构(Structure) |
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注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
2)含有 X-Gal 的培养基 4℃避光保存,须在1周内使用。
3)本产品仅作科研用途!
配制储存液
称取200 mg X-Gal于15 mL 离心管,向其中加入10 mL DMF,旋涡震荡使其充分溶解后于-20℃避光保存,正确操作下,有效期可达5-12个月,如小量频繁使用,建议分装成1 mL/管后避光冻存。
蓝白斑筛选
1. X-Gal、IPTG 加入琼脂培养基溶液
1)高压灭菌已加琼脂的培养基,并冷却到50℃左右。
2)每毫升培养基内加入10 μL 20 mg/mL X-gal溶液、10 μL 0.1 M的IPTG(使其终浓度达到1 mM);
3)加入适量抗生素;
4)混匀后按照平板大小倒入适量培养基,待培养基冷却至室温后,接种细菌于37℃过夜培养。
2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面
1)于无菌超净工作台制备平板(如LB 琼脂板);
2)取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合,均匀地涂布于准备好的平板上;
注:平板边缘较难充分涂布均匀,容易产生假阳性,因此,为了得到更好结果,建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。
3)37℃孵育直至所有液体被吸收(30 min或更长)。接种细菌于37℃过夜培养。
HB211112
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文献和实验有一个配制方法可以参考: 【X-gal溶液配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。 也就是每1ML中称取20MG就行 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法,是根据载
能的β-半乳糖苷酶,该酶能把培养基中无色的X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)底物分解成半乳糖和深蓝色的5-溴-4-氯-靛蓝。然而当外源DNA 插入质粒位于α-肽编码序列中的多克隆位点时,由于破坏了α-肽的阅读框架,因而不能表达出与宿主菌基因组表达的缺陷型β-半乳糖苷酶多肽发生α-互补。由于没有β-半乳糖苷酶的酶解作用,致使重组菌形成白色菌落。由此,可以借助蓝白斑很容易筛选出重组子.不过实际操作中发现当插入小片段时,重组子也有形成浅蓝斑的情况.即蓝色菌斑也有可能含外源基因。据最新报道,大概
实验中,通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素,这样,一次筛选可以判断出:未转化的菌不具有抗性,不生长;转化了空载体,即未重组质粒的菌,长成蓝色菌落;转化了重组质粒的菌,即目的重组菌,长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步骤,造成IPTG和X-Gal滞销主要是蓝白斑筛选存在假阳性的情况,IPTG和X-Gal的购买、配制、涂布也增加了实验的步骤针对这个情况,我们现在推出一个新品相:Ready to use LB











