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CIAP小牛肠碱性磷酸酶 Al
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Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)
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有效期18个月
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20℃
1000 U
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶
10321ES80
1000U
936.00
产品描述
Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分
组分编号
组分名称
产品编号/规格
10321ES80(1000 U)
10321-A
Alkaline Phosphatase (30 U/μL)
10321-B
10×AP buffer
1 mL
产品性质
来源(Source)
携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制(Quality Control)
无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活(Thermal Inactivation)
在螯合剂存在下,65℃加热30 min,99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完全失活。
储存液条件(Storage conditions)
10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM ZnCl2,50% glycerol.
活性定义(Unit definition)
在pH9.8,37℃条件下,以对硝基-苯-酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH(Optimal pH)
该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10,在底物浓度低时,最佳pH为8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系(Optimal Buffer)
AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM MgCl2)
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存,有效期18个月。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2)本产品仅作科研用途!
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5 mL离心管中加入下列试剂:
组分
体积
无菌ddH2O
Up to 50 µL
DNA 片段*
1-20 pmol
Alkaline Phosphatase
1-2 µL
5 µL
【*】单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂,于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min。
2 酚氯仿法抽提DNA
① 苯酚/氯仿/异戊-醇(25:24:1)抽提2次。
【注】:推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA,0.5% SDS,50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,灭活效果更佳。
② 氯仿/异戊-醇(24:1)抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5 µL 3 M NaCl(终浓度150 mM)。
② 加入125 µL(2.5倍体积)预冷乙醇,混匀后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA。
4 溶解DNA
离心,彻底去除乙醇后,将DNA溶于适量去离子水(<20 µL)。
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