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- 单个蛋白质身份鉴定是生物化学领域非常常见的问题，目前有两大方法论：Edman降解法和质谱方法。质谱方法又细分为两大类型：MALDI-TOF和LC-MS/MS。但是，主流文献中的方法都是LC-MS/MS(首选AB SCIEX的5600-plus或者thermo公司的orbitrap类型的质谱仪)
- 武汉
- 2025年07月14日
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- 服务名称：
单一蛋白质鉴定
- 提供商：
cusabio
武汉华美采用AB SCIEX的5600-plus质谱平台，可提供以下技术服务：
1 胶内酶解和质谱鉴定
蛋白质组学研究中，常用双向电泳(Two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)分离蛋白质混合物，收集目的蛋白质斑点，经胶内酶解后用于质谱分析以获得蛋白质信息。该分离鉴定方法是目前使用最广泛的蛋白质组学研究手段。
武汉华美对胶内酶解法进行优化，可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率。
图：单个蛋白质的鉴定流程图(基于SDS-PAGE的胶点鉴定)。
2 单一蛋白质磷酸化修饰位点鉴定
蛋白质翻译后修饰对细胞的调控机制起着重要的作用，能够影响蛋白的多种属性，包括蛋白质折叠、活性以及最终的功能，对于蛋白质修饰位点的发现及研究对阐明蛋白质的功能具有重要作用。
武汉华美可提供单一蛋白质的磷酸化鉴定技术服务，通过TiO2或IMAC富集磷酸化肽段，5600-plus质谱检测，利用得到的质谱谱图与相应数据库搜索比较，从而得到肽段序列结果，同时通过生物信息软件计算出磷酸化位点。TiO2或IMAC富集的方法要显著优于体外kinase和multiple recombinant substrate体外反应后通过放射性检测，具备时间快、磷酸化位点识别准确等优点。
图：TiO2或者IMAC富集磷酸化流程图。
3 单一蛋白质的NH2测序
几乎所有的蛋白合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。
N端测序一般采用Edman 降解法和质谱法，但Edman不能解决N端封闭肽的测序问题。武汉华美采用质谱法进行N-端测序，可以测出封闭的或修饰的蛋白质末端，所需样品量少、速度快。
4 单一蛋白质的COOH测序
C端序列是蛋白质和多肽的重要结构与功能部位，对蛋白质的生物功能甚至起决定性作用。此外，由于蛋白翻译后在细胞内需要进一步剪切和修饰，通常不能简单的使用基因序列对C-端或N端做简单的预测，对于蛋白生物制品来说，使用C-端测序必不可少。
蛋白质C端测序有3种方法：羧肽酶法、化学法及串联质谱法。目前使用较多的是利用串联质谱法，其原理为利用蛋白质在质谱中会有规律的破碎，获得蛋白质肽段的碎片，分析图谱得到蛋白质的C-端序列。武汉华美采用串联质谱法进行C-端测序。
5 单一蛋白质的互作蛋白质的发现
蛋白质之间的相互作用是许多重要的生物功能、生物过程的基础，如信号传导、蛋白复合物、蛋白修饰等。武汉华美提供单一蛋白互做蛋白质发现的全套服务，服务流程如下：
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文献和实验注：如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学，请将样本要求量进行加和。 备注：请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液，超过 50ml，每 50mL 算作一个 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心，每 5mL 算作 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。
蛋白质鉴定工具 蛋白质鉴定意味着将实验测定的蛋白质性质和可以利用计算机手段从一个数据库得到的蛋白质性质进行比较。考虑到这些不同的性质，已经开发了一大批蛋白质鉴定工具，如氨基酸组成、序列标签或质谱衍生的数据等，所有的这些工具都是通过与蛋白质数据库中的某一个蛋白质条目提供最佳的匹配来达到鉴定蛋白质的目的。 以PMF和MS／MS为基础的蛋白质鉴定工具只能对部分实验信号进行注释或解释。当前已有的工具能够寻找肽的氨基酸序列，某些修饰应予考虑。这些修饰包括那些已知的由实验
基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
物干燥，连续洗涤使用预制型的薄层基质。该方法为精确和灵敏的MALDI检测创造了最佳条件。然而，这种样品制备方法制备的样品不能承受激光辐射，会被迅速漂洗。因此，该方法不适用于PSD光谱的蛋白质谱鉴定，因为PSD光谱法通常每个片段质量范围需要多达100甚至以上次数反复的激光辐射。 如果在分析之前，使用小型吸附柱对较大体积的肽混合物进行浓缩，抑或通过向肽混合物中添加少量反相色谱珠的方式进行批量吸附。而进行批量吸附，只需要将磁珠吸附到的肽混合物进行洗涤，即可获得肽混合物，然后转移至上样处并干燥即可。这种
