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- 江苏南京
- 2025年12月07日
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细胞转染
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凯基生物
| 细胞转染 | |
| 实验目的：将质粒携带的目的基因导入真核细胞，是目的基因表达蛋白 实验原理：脂质体为人工膜泡，可作为体内，体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体，由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似，因此，可与 细胞膜融合，将DNA转入宿主细胞。 实验材料：试剂：Lipofectamine 2000 仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜 实验内容与方法： 瞬时转染：1.细胞准备：细胞接入6孔板，待细胞汇合至80，更换不完全培养基，饥饿24h； 2.转染液制备：分别稀释质粒和转染试剂； 3.转染制备：混合质粒和转染试剂； 4.转染。 稳定转染：瞬时转染后筛选单克隆，筛选出高表达的细胞株。 实验信息（客户）：1．生长状况良好的宿主细胞株，并提供细胞特性、培养条件及相关注意事项。 2．提供质粒，并说明质粒大小，浓度，抗性，拷贝数等相关背景资料。 服务周期：瞬时转染：2周；稳定转染：2月 结果提交：提交实验报告书（实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）；转染细胞株 瞬时转染绿色荧光蛋白的B16F10 |
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文献和实验转染是否成功的影响因素很多，如需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），转染试剂等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。 细胞 分裂细胞相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源 DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态；此外，还常用促有丝分裂刺激物（如，病毒转化，生长因子，条件
到细胞完全从壁上脱落下来为止。 （4） 加入1ml的含血清培养基终止反应。 （5） 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 （6） 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 （7） 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 （8） 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 （9） 将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。 2、细胞转染 （1）转染试剂的准备 A. 将400ul去核酸酶水加入管中
细胞转染的方法主要有三种，分别是磷酸钙-DNA 共沉淀法、DEAE-葡聚糖转染、脂质体介导 DNA 转染法，今天师兄就先从磷酸钙-DNA共沉淀法讲起。 磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这回利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA，仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞 DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术
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