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- 细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
细胞转染
- 提供商：
XSL
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
因为不同的细胞在生理代谢及分裂上均存在差异，因此研究者将外源遗传物质导入细胞的过程中需要选择不同的方式。目前，将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类：
1、脂质体（或是脂质体替代物）转染；
2、电转；
3、病毒感染。
这三种方法互有优劣。脂质体或是脂质体替代物转染操作简便，价格低廉，但是对细胞毒性大。而且，有些细胞通过脂质体转染效率很低；电转操作方便快捷，但是需要专门的仪器，对细胞损伤也比较大；病毒感染克服了前两者的劣势，感染效率高，对细胞毒性小，但是病毒前期包装需要大量的时间和精力。
实验操作流程：
1、转染试剂的准备
a. 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
b. 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2、选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1] 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体 积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3、将混合液在室温放置10-15分钟。
4、吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5、加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6、到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。
客户提供：
1、细胞株（可由我们代购）
2、转染基因信息、载体、转染细胞样本、相关文献和转染基因。也可由我们设计并收费合成含转染基因的质粒。
3、冻存细胞样品，以干冰运输；培养细胞样品，密封培养瓶灌满生长培养基运输。
交付标准：
1、转染细胞株
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）
其他： 细胞转染时DNA量如果比较多，转染时培养基中如果有抗生素，是否会导致细胞死亡。
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文献和实验转染是否成功的影响因素很多，如需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），转染试剂等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。 细胞 分裂细胞相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源 DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态；此外，还常用促有丝分裂刺激物（如，病毒转化，生长因子，条件
到细胞完全从壁上脱落下来为止。 （4） 加入1ml的含血清培养基终止反应。 （5） 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 （6） 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 （7） 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 （8） 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 （9） 将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。 2、细胞转染 （1）转染试剂的准备 A. 将400ul去核酸酶水加入管中
细胞转染的方法主要有三种，分别是磷酸钙-DNA 共沉淀法、DEAE-葡聚糖转染、脂质体介导 DNA 转染法，今天师兄就先从磷酸钙-DNA共沉淀法讲起。 磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这回利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA，仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞 DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术
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