Vero细胞(无圆环病毒污染、保成活)

vero（非洲绿猴肾细胞)的传代

传代步骤比较传统：倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。我的体会是：1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。2、消化到什么程度可以，经验很重要，如果每瓶消化都要通过显微镜观察来判断，首先效率太低，而且还很容易消化过头。对光观察培养瓶，当感觉到有些泛白，瓶角有少许细胞

vero（非洲绿猴肾cell)的传代

vero（非洲绿猴肾cell):贴壁细胞，以25ml小方瓶为例，培养液用的是MEM。 MEM的配制：10%小牛血清，1%双抗，3%谷氨酰胺，1~1.5%NaHCO3. 传代方法： 1、倒掉培养液，如果细胞脏的话可用PBS洗两次，否则不用。 2.、胰酶0.25%2ml消化1~3分钟，容易消化. 3、倒掉胰酶，加MEM9~12ml,将贴壁细胞摇至悬浮，并用吸管吹匀，一传三或一传四。 4、置37度，5%CO2孵箱。

关于疫苗中Vero传代细胞DNA残留检测技术

多年来，国外已成功的研制了采用Vero细胞生产疫苗并获准上市，包括人用狂犬病纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活（纯化）疫苗（IPV），并在中国注册或正在注册申请中。在上世纪九十年代后，国产的采用Vero细胞生产的人用狂犬病纯化疫苗、乙型脑炎纯化疫苗、肾综合征出血热纯化疫苗被批准上市。近年来，又有一些企业申请乙型脑炎纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活（纯化）疫苗、甲型肝炎灭活疫苗进行临床研究或上市。随着采用Vero细胞生产疫苗种类的增多，并且使用人群扩大到婴幼儿，其细胞残留物质越来越受到关注，已成为我们审评中重点