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Plasmid
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北诺生命科学
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下面所有质粒和菌株,均为本公司实验室亲自验证过,可以提供技术支持,载体来源于promega,addgene,clontech,novagen,invitrogen可提供质粒图谱,可提供近万种质粒载体、菌株、基因和细胞株,并可提供实验技术外包服务,如基因克隆、质粒构建、蛋白原核、真核表达及纯,pQE 载体,原核表达载体,克隆载体 ,毕赤酵母表达载体,毕赤酵母宿主菌,酿酒酵母表达载体 ,酿酒酵母宿主菌,真菌表达载体,真核哺乳动物荧光载体,真核哺乳动物载体,植物表达载体,大肠杆菌宿主菌,枯草宿主菌
酿酒酵母表达载体
pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF,pY15TEF,pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187,酿酒酵母AH109;质粒pGADT7,pGBKT7;对照质粒pGBKT7-53,pGBKT7-lam,pGADT7-T,PCL1,酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190, 毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc,配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33,KM71,KM71H,GS115,
原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列,pET-GST,pGEX系列(含GST标签),pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列,pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列,pBV220,221,222,pTXB系列,pLLP-ompA,pIN-III-ompA(分泌型表达系列),pQBI63(原核表达带荧光)pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF(+), pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk 233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK(+),pBlueScript SK(-) pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒: pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒:pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1,pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣: pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞: DH5a JM101 JM103 JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21(DE3) HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21(AI) BL21(DE3)plysS TG1 TB1 DH5a(pir) Tuner(DE3) Bl21 codonplusRIPL Novablue(DE3) Rosetta Rosetta(DE3) Rosetta(DE3)plys Rosetta-gami(DE3) Rosetta-gamiB(DE3), Rosetta-gamiB(DE3)plysS Orgami(DE3) OrgamiB(DE3) HMS174(DE3)
植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301, pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIA super1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2, T-DNA插入载体(随机突变体库)pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1
枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43, pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK, pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641, pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01, 配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700, WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33
RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0,pSilencer 2.1-U6 hygro, pSilencer 3.1-H1 hygro,pSilencer 3.1-H1 neo, pSilencer 4.1-CMV neo, pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体(oligoengine) pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体(clontech): RNAi-Ready pSIREN-Retro Q, RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen(Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide) RNAi慢病毒载体(addgene): pLKO.1 pET载体
3a, 3d
3c-sumo
5b
11a A+
12a A+
15b A+
16b A+
17b A+
19b A+
20b A+
21a,21b,21d A+
22b A+
23a,23b A+
23a-tev
24a K+
25b K+
26b K+
27b K+
28a,28b,28c K+
28a-sumo
28a-p53
29a K+
30a ,30c K+
31b A+
32a A+
32a pelB A+
35b K+
39b K+
40b K+
41a,41b k+
42a,42b K+
43b A+
43.1a A+
44a A+
48b K+
49b K+
50b K+
pETduet-1
pACYCduet-1
pCDFduet-1
pRSFduet-1
pColAduet-1
pET His
pET DsbA
pET GST
pET Trx
pQE载体
PQE2
pQE9
pQE30,31,32,
pQE30UA
pQE30LacIq
pQE40L
pQE60
pQE70
pQE80L
其他原核表达载体
PBBR1 MCS Cm+
PBBR1 MCS-2 K+
PBBR1 MCS-3 Tet+
PBBR1 MCS-4 A+
PBBR1 MCS-5 庆大霉素
pMal c2x,p2x,5x,5E
pBV220,221,222
pTrc99a,pTrcCKS,pTrcHis A,B,C
pBAD24,33,43,pBADHis A,B,C,pBADmycHisA
pEZZ18
pThio HisA A+
pGEX4T-1,4T-2,4T-3,5X-1,6p-1,2t,3x
pColdI
pColdII
pColdIII
pColdTF
pTwin1
pRsetA,B,C
PLLP-STQ
pINⅢ-ompA
pkk223-3
pSE380
pJLA502
pMBP-C,pMBP-p
pTYB11,pCYB1
Origene-N-His GST A+
pPin point CAT A+
pPin point xa1 A+
pPin point xa2 A+
pPin point xa3 A+
pCW ori
、
常见克隆载体
puc18,puc19,puc118,puc119
pBlue Script SK+,
pBlue ScriptⅡSK+
pEGM-3ZF(+) A+
pEGM-11ZF(+) A+
pACYC184
pBR322
基因敲除
pKD3,pKD4,pKD46,pcp20
pK18mobSacB
海肾荧光素酶报告基因
pGL3basic,promotor,enhancer,control
pGL3 CM
pGL4.29,4.30
毕赤酵母表达载体
pPIC9
pPIC9k
pPIC9k-1
pPIC9k-His
pPIC3.5
pPIC3.5k
pAO815
pHIL-S1
pPICZalphaA,B,C
pPICZalpha D
pPICZalpha E
pPICZalpha GA,GB
pPICZalpha FC
pPICZA,B
pGAPZalphaA,B,C
pMETalphaA,B,C
pFLD-cat A+
pFLD-cat Z+
pFLD1 Z+
毕赤酵母宿主菌
JC220
JC308
GS200
GS190
GS115
KM71
KM71H
Y1991
SMD1168
SMD1168H
X33
酿酒酵母表达载体
pYES2,pYES2-flag
pYES2NTA,NTB,NTC
pYES3CT
pYIP5,pYRP7,pADH2
pRSH41,pDC315,pDF15,pUG6
pESC-His,BFD14,BFD15,pDNR1,p334,pDR195
pRS316,pRS316HA
YEplac112,YCplac33,YCplac22-EGFP,
YEplac195,YEpLac181,YIP211
pYX212,pYX212-VHB
酿酒酵母宿主菌
INSV-
YPH499
YM4271
BY4741
W303-1A
真核哺乳动物荧光载体
pEGFP N1,N2,N3
Origene GFP
pLEGFP N1
pEGFP C1,C3
AIF-EGFP N1
pECFP N1,C1
pEYFP N1,C1
pEYFP-golgi
pEYFPmem
pBFPN1
FIV-BFP
pDsred MonomerN1
pDsRed1 mito
pDsRed2 mito
pDsRed N1,C1
pDsRed2 N1,C1
pDsRed2-ER
mRFP
真核哺乳动物载体
pIRES
pIRES2-EGFP
pADeasy-1
pADeasy-1(Bj5183)
pAdtrack
pAdtrack CMV
pShuttle
pShuttle CMV
pRL CMV
pCMV-HA
pVAX1
pVAST
pCI
pCI neo+
pCMV-myc
pflag-CMV2
pcDNA3.1 +
pcDNA3.1 zeo+
pcDNA3.1 neo+
pcDNA3.1 MycHisA
pcDNA3.1 MycHisB
pcDNA3.1-HBV genome
pcDNA3-mRFP
Hsp70-pcDNA3.1
pcDNA 4 Max B
psuper GFP neo
psuper Retro GFP neo
pSilencer4.1CMV puro+
pSilencer4.1CM neo+
psuper GFP neo
psuper retro GFP neo
pdisplay
pBud CE4.1
ptet on, ptet off
pRL-tk,pRL-CMV
植物表达载体
pcambia1301,1302,1303,1304,1305.2
2300,2301
3300
pcambia1301(EHA105)
pcambia1381Z,1391Z
PBI121,221
PBI221-GFP
植物农杆菌宿主
EHA105,LBA4404
植物RNAi载体
PHANNIBAL,PKANNIBAL
启动子检测
pEGFP-1
pkk232-8
分子伴侣:
PGKJE8,PGro7,pTf16,pKJE7,pGTf2
酵母双杂交
pGADT7,pGBKT7,pGADT7-T,pGBKlam,pGBK-53,pCL1
AH109,Y187
酵母单杂交
pGAD53m,p53-blue,p53-His,pLacZ,pHis,pHisi-1,
哺乳动物双杂交
pBIND-GFP,pBIND-ID,pGAD424,pGBT9,pG5lac,
大肠杆菌宿主菌
JM101,105,109,110
HB101,K802,C600,TH1,AM1,W3110,DH10bac
Y1089,Y1090,BL21,BL21(DE3),MG1655
BL21(DE3)plysS,BL21AI,BL21SI,BL21codon plus RIPL,BL21 trxB (DE3),BL21 star
DH5α,DH5αλpir,JM109,JM109(DE3),Top10,Top10F,,K12,DB3.1,XL1-blue,XL-10gold,BM25.8,SG1117,Turbo,TG1,TB1,C41(DE3),C43(DE3),Turner(DE3),M15,E2566,C2566,ER2529,JF1125,Bj5183,Stbl3,Stbl4
HMS174(DE3), HMS174(DE3)plysS, AD494(DE3)
Novablue(DE3),Rosettalblue(DE3)
Rosetta(DE3),Rosetta(DE5),Rosetta(DE3)plysS,
Orgami(DE3),OrgamiB(DE3),Orgami(DE3)plysS
Rosetta-gami2(DE3)plysS,Rosetta-gami(DE3),
Rosetta-gamiB(DE3),Rosetta-gamiB(DE3)plysS, Rosetta-gami(DE3)placI
枯草表达系统pMA5,pHCMC05,pGFP22,pGFP315,pHP13,pHP13-43,pHY-43,pWB980,pAOX1
枯草宿主菌:BS168,DB403,BCL,1A75,WB600,WB800N
昆虫表达系统:pfastBacI,pfastII,pfastIII,pfastBacHTA,pfastBacHTB,pfastBacHTC,pfastBacdual
巨大芽孢杆菌系统:pHis1525
巨大宿主菌:YYBM1,WH320
乳酸球菌表达系统 pMG36e,NZ9000,MG1363
乳酸酵母表达系统 pKLAC1,GG799
白色念珠菌系统pCR4,pCR4-GFP,p5921
酿酒酵母表面展示系统:pYD1,EBY100
标准微生物菌株
ATCC27853 铜绿假单胞菌
ATCC29212 粪链球菌
ATCC29213 金黄色葡萄球菌
ATCC35218 大肠杆菌
ATCC 35098四联球菌
NRRL Y-12968热带假丝酵母
NRRL Y-2021德巴利酵母
NRRL Y-1603毕赤氏巴斯德酵母
DSM3586野油菜黄
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文献和实验年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型[1]。直到现在,运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。(1)利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤:①. 基因载体的构建:把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 分子都重组到带有标记基因(如neo 基因,TK 基因等)的载体
序列的距离是否合适,如果不合适可能会影响表达效率。“酶切复酶切,电泳加连接”,讲真,这一圈下来有时挺让人崩溃的。 技术的发展不断向前。受同源重组启发而出现的重组酶和 TOPO 克隆技术,能快速实现目标基因到载体、以及不同表达载体之间切换构建,但需要分别在载体和目标基因两端各引入一段特定酶识别序列,以实现同源重组,而这额外十多个碱基的特定序列始终保留在克隆产物上消不掉——目标片段后面多一点不要紧,目标片段前面这一截(通常在启动子后/ ATG 前面)真是如鲠在喉——要是这段序列正好是载体两端
小鼠实验 AAV 载体包装能力有限性 大基因片段分两段用不同的载体分别进入体内,在体内进行同源重组 目的基因表达蛋白的轻链和重链放在不同载体上,在体内表内后也会自己重组 遗传毒性 肝细胞的自我更新增加 AAV 基因整合到小鼠体内基因组上的概率,AAV 基因组整合诱导小鼠肝细胞癌(HCC)的发生。
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