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- 2026年01月07日
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iTRAQ/TMT标记定量蛋白质组研究
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Biotree
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Ma ss Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术,采用多种同位素的标签,可与氨基(包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基)反应实现连接,通过高精度质谱分析,同时实现多个样本蛋白组的定性和定量。
iTRAQ/TMT试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团形成2-16种等质量同位素标签。iTRAQ/TMT试剂标记酶解后的肽段的N端及赖氨酸侧链氨基。在MS/MS分析中,每个同量异序标签都能够产生一个独特的离子图谱，因此可以利用该标签进行定量。在一级质谱分析中,标记的多肽是无法彼此区分出来的。然而，在二级质谱模式下,报告基团、平衡基团和反应基团之间的键断裂,带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子。通过比较二级谱图中的不同报告离子的强度就可以对蛋白进行定量。
试剂盒种类
▶ iTRAQ：
4 plex
8 plex
▶ TMT：
2 plex
6 plex
10 plex
11 plex
16 plex
应用方向
食品科学领域：提高食品安全，改善口感和营养程度的研究
畜牧业领域：提高肉类品质和饲养条件
病毒领域：新型病毒抑制因子挖掘研究
生物疾病发生发展过程分子机制研究
农业领域：农作物发育机制的研究
生物疾病标志物研究
药物作用靶点研究
药物作用机理研究
技术流程
技术参数
▶ 产品类型
标记定量蛋白组
▶ 仪器平台
Orbitrap 系列（Q Exactive HFX, Thermo/Orbitrap Exploris 240, Thermo 等）
▶ 搜库软件
Proteome Discoverer / MaxQuant
寄样要求
▶ 样本要求
动物组织标本：100 mg/sample
血清、血浆：200 μL/sample
细胞、微生物：1X107cells/sample
植物嫩叶、嫩芽：200mg/sample
植物种子、果实：500mg/sample
▶ 液氮或-80°C保存，足量干冰运输，避免反复冻融
技术优势
适用范围广
可检测到的蛋白除了胞浆蛋白外，还有线粒体蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量、酸性、碱性蛋白质。
高通量
一次可以实现多个样品的定性定量分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。
结果可靠
基于高灵敏度和高分辨的串联质谱方法，定性与定量同步进行，同时得出定性和定量结果，重复样品间的蛋白表达量相关性高。
灵敏度高
分级分离，降低样品复杂度，相比凝胶电泳观测到的蛋白变化在2倍以上，iTRAQ计算出的蛋白变化在通常1.3-1.6倍之间，可检测低丰度蛋白。
分离能力强
可分离出酸/碱性蛋白，小于10KDa或大于200KDa的蛋白、难溶性蛋白等。
自动化程度高
液质联用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。
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