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文献和实验童鞋们都知道,要想成为真正的 PCR 达人,并非易事。一个小小的环节都可能让整个实验挂掉,也正是因此,PCR 成为了资深科研者们心中的痛。 不要说实验本身,其实就连实验的耗材都隐藏着大学问,工欲善其事,必先利其器。 今天我们就具体来说下 PCR 耗材中选择选择反应板的问题。 PCR 板通常采用 96 孔和 384 孔的形式,其次为 24 孔和 48 孔。使用的 PCR 仪和正在进行的应用的性质将决定 PCR 板是否适合您的实验。 裙边 PCR 板的“裙”是板周围的板。裙边可为反应体系构建时
应该控制在10-30°C之间。 湿度:20-80%;对于潮湿的省份,推荐实验室配备除湿机。 空间:易于操作,安全。7. 怎样判断定量pcr仪的样本加热块是否被污染?怎样清除污染? 一个办法是运行背景校正反应板,当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高信号,则表明该孔可能被荧光污染物。 另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下,执行ROI的校正,当某个孔的信号明显高出其他孔时,则表明该孔被污染。清除样本加热块污染的步骤如下: 用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。 吹打数次
功能关闭,否则可能会出现图一左图所示的,扩增曲线异常的现象。遇到这种问题,可以在 Plate Setup 设置中找到 Passive Reference,把 ROX 改为 None,重新分析一下,结果就变正常了(图一右图)。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器默认是对所有荧光通道及所有样品孔进行荧光采集,用户不用担心数据丢失,实验完成后,还可以对设置错误的反应孔的荧光通道、样品名称等进行更改。 图一:使用不含 ROX 试剂,忘记更改 Passive
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