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药物对不同细胞因子激活的信号通路的影响2

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  • 2025年07月15日
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      药物对不同细胞因子激活的信号通路的影响2

    4 、药物对TNF- α /NF- k B 信号通路的影响
    TNF/NF- k B 信号通路介绍
    TNF 是一种糖蛋白,是目前抗肿瘤效果最强的细胞因子,它以两种形式存在:TNF- a 和TNF- b ,两者分子结构相似,所发挥的生物学效应也相近。TNF与受体(TNF receptor, TNFR)结合后引起受体多聚化,这种多聚化使得TNF受体与细胞质中TRADD分子发生相互作用。TRADD招募相应蛋白后介导两条转导通路:一条是通过TRAF2和RIP分子诱导NF-κB的活化,参与抗凋亡;另一条是通过FADD分子导致细胞凋亡。
    NF- k B (nuclear factor-kappa B)是真核细胞转录因子Rel家族成员之一,通常情况下,细胞质中的NF- k B 处于失活状态,与抑制蛋白I k B (inhibitory protein of NF- k B )结合成复合物。当TNF与细胞膜表面的TNF受体结合后,TNF受体发生多聚化并与细胞质中TRADD分子发生相互作用。TRADD招募TRAF(TNFR-associated factor)和激酶RIP(receptor
    interacting protein ),由RIP将信号传递给IKK(I k B kinase )。在NF- k B 信号通路中IKK扮演了非常重要的角色,尽管上游信号路径的不同,但是最终都汇集到IKK。IKK由 a b g 三个亚基组成,作为激酶的IKK能使I k B 磷酸化。磷酸化的I k B 随即从p50/p65/I k B 三聚体中解离出来,经泛素化修饰后通过蛋白酶体降解。于是,被释放的NF- k B 得以从细胞质进入细胞核内,与核内DNA上的特异序列相结合,从而启动相关基因的转录。
    NF- k B 具有明显的抑制细胞凋亡的功能,与肿瘤的发生、生长和转移等多个过程密切相关。NF- k B 在很多癌细胞中表达异常,如在75%的乳腺癌样品中NF- k B 的表达比邻近的正常组织高很多倍。NF- k B 对肿瘤转移具有明显的促进作用,它能促进肿瘤转移相关基因ICAM-1、VCAM-1、MMP-9等的表达。NF- k B 还能诱导血管内皮生长因子VEGF的表达,促进血 管形成。此外,NF- k B 还能通过调节COX2等基因的表达来促进肿瘤生长。NF- k B 信号通路的抑制剂有很好的抗肿瘤作用和多种免疫调节功能,具有非常广泛的应用前景。
    原理
    我们建立了稳定转染了NF- κ B-luciferase 报告基因质粒的HEK-293细胞,在培养基中加入TNF- α 后可以激活NF- κ B 信号通路,酶标仪可以检测到增强的荧光信号。在加入TNF- α 之前或同时加入药物,孵育一定的时间后在酶标仪上读数,通过OD值可以计算该药物对此信号通路抑制/增强的百分比。
    结果判断
    4 化合物D对NF- κ B信号通路的调节
    组别
    TNF- αIU/ml)
    待测药物(μM)
    抑制率
    (%)
    阴性对照组
    -
    -
    -
    TNF- α
    25
    -
    -
    实验组
    25
    200
    87
    25
    100
    87
    25
    50
    86
    25
    25
    74
    25
    10
    46
    25
    5
    11
    25
    2.5
    10
    25
    1
    9
    5 、药物对 MAPK 信号转导通路的影响
    原理
    丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究证实,MAPKs信号转导通路存在于大多数细胞内,在将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,并引起细胞生物学反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)的过程中具有至关重要的作用。 目前已发现存在着下述三条并行的 MAPKs 信号通路: ERK 信号通路、 JNK SAPK 通路、 p38 MAPK 通路。
    6 、药物对 PI3K/AKT 通路的影响
    原理
    PI(3)K信号就被视为一条与肿瘤密切相关的信号通路。在淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、前列腺癌以及其它癌症中这条通路都具异常性。 PI(3)K信号通路可以通过激活RTK和Ras,进而活化下游的靶蛋白mTOR。丝/苏氨酸蛋白激酶AKT家族的很多成员都是PI(3)K信号通路在癌症中的重要靶点,例如在10%~20%的胰腺癌、40%的肝癌和50%的结肠癌中都可以检测到AKT2的突变。

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    • 【求助】如何检测某种药物对AKT信号通路的影响

      烟花三月 除了用western blotting检测AKT和p-AKT以外,还有什么其他方法吗? 谢谢! doctormy 其余的方法还有流式细胞仪、细胞免疫荧光(免疫细胞化学)、免疫组化等。 需要说明的是,一定要根据实验目的和方法来买相关的抗体,曾经有个同学想做免疫组化,但却没认真去查文献资料,就草草订购了抗体,结果买回来才发现其买的类型不适合做组化,白浪费了两个多月。 附细胞免疫荧光的图片

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