药物对不同细胞因子激活的信号通路的影响2

4 、药物对TNF- α /NF- k B 信号通路的影响

TNF/NF- k B 信号通路介绍

TNF 是一种糖蛋白，是目前抗肿瘤效果最强的细胞因子，它以两种形式存在：TNF- a 和TNF- b ，两者分子结构相似，所发挥的生物学效应也相近。TNF与受体（TNF receptor, TNFR）结合后引起受体多聚化，这种多聚化使得TNF受体与细胞质中TRADD分子发生相互作用。TRADD招募相应蛋白后介导两条转导通路：一条是通过TRAF2和RIP分子诱导NF-κB的活化，参与抗凋亡；另一条是通过FADD分子导致细胞凋亡。

NF- k B （nuclear factor-kappa B）是真核细胞转录因子Rel家族成员之一，通常情况下，细胞质中的NF- k B 处于失活状态，与抑制蛋白I k B （inhibitory protein of NF- k B ）结合成复合物。当TNF与细胞膜表面的TNF受体结合后，TNF受体发生多聚化并与细胞质中TRADD分子发生相互作用。TRADD招募TRAF（TNFR-associated factor）和激酶RIP（receptor

interacting protein ），由RIP将信号传递给IKK（I k B kinase ）。在NF- k B 信号通路中IKK扮演了非常重要的角色，尽管上游信号路径的不同，但是最终都汇集到IKK。IKK由 a 、 b 和 g 三个亚基组成，作为激酶的IKK能使I k B 磷酸化。磷酸化的I k B 随即从p50/p65/I k B 三聚体中解离出来，经泛素化修饰后通过蛋白酶体降解。于是，被释放的NF- k B 得以从细胞质进入细胞核内，与核内DNA上的特异序列相结合，从而启动相关基因的转录。

NF- k B 具有明显的抑制细胞凋亡的功能，与肿瘤的发生、生长和转移等多个过程密切相关。NF- k B 在很多癌细胞中表达异常，如在75％的乳腺癌样品中NF- k B 的表达比邻近的正常组织高很多倍。NF- k B 对肿瘤转移具有明显的促进作用，它能促进肿瘤转移相关基因ICAM-1、VCAM-1、MMP-9等的表达。NF- k B 还能诱导血管内皮生长因子VEGF的表达，促进血 管形成。此外，NF- k B 还能通过调节COX2等基因的表达来促进肿瘤生长。NF- k B 信号通路的抑制剂有很好的抗肿瘤作用和多种免疫调节功能，具有非常广泛的应用前景。

原理

我们建立了稳定转染了NF- κ B-luciferase 报告基因质粒的HEK-293细胞，在培养基中加入TNF- α 后可以激活NF- κ B 信号通路，酶标仪可以检测到增强的荧光信号。在加入TNF- α 之前或同时加入药物，孵育一定的时间后在酶标仪上读数，通过OD值可以计算该药物对此信号通路抑制/增强的百分比。

结果判断

表 4 化合物D对NF- κ B信号通路的调节

组别	TNF- α（ IU/ml）	待测药物（μM）	抑制率 （％）
阴性对照组	-	-	-
TNF- α组	25	-	-
实验组	25	200	87
	25	100	87
	25	50	86
	25	25	74
	25	10	46
	25	5	11
	25	2.5	10
	25	1	9

5 、药物对 MAPK 信号转导通路的影响

原理

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated　protein　kinases，MAPKs）是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。研究证实，MAPKs信号转导通路存在于大多数细胞内，在将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应（如细胞增殖、分化、转化及凋亡等）的过程中具有至关重要的作用。 目前已发现存在着下述三条并行的 MAPKs 信号通路： ERK 信号通路、 JNK ／ SAPK 通路、 p38 MAPK 通路。

6 、药物对 PI3K/AKT 通路的影响

原理

PI(3)K信号就被视为一条与肿瘤密切相关的信号通路。在淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、前列腺癌以及其它癌症中这条通路都具异常性。 PI(3)K信号通路可以通过激活RTK和Ras，进而活化下游的靶蛋白mTOR。丝/苏氨酸蛋白激酶AKT家族的很多成员都是PI(3)K信号通路在癌症中的重要靶点，例如在10%～20%的胰腺癌、40%的肝癌和50%的结肠癌中都可以检测到AKT2的突变。