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- 2025年07月13日
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100ml
ECL试剂盒，Bestbio贝博
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文献和实验已经转印在膜上了，但是做了很多次了都没有曝光出条带来，用的是 supersignal ECL 试剂盒曝光的。 之前怀疑所配试剂有问题，但是把所有试剂都重新配过了，还是一样的结果！实在找不出什么原因了。现在想会不会是上样量太低了？ 请帮帮忙，实验已经进行了半年了，可是一点进展都没有，心里焦急死了！谢谢回复！ magichunter 1，你的上样量肯定是够的，这个没问题
【求助】(Western Blot) 检测不到P-erk却能检测到erk
出来。 magichunter （1）即使是正常细胞（没有激活）中，也是可以检测到P-ERK的。如果没有检测到肯定是你的方法的问题。另外你说能检测到ERK，那么其条带清楚吗？如果ERK的条带不是太清楚，或者是中等强度的话，那P-ERK肯定检测不到。正常情况下的ERK条带应该是很浓很浓的才对。 （2）加大蛋白上样量试试，先增加一倍试试看。 （3）加大一抗和二抗的剂量，增大一倍试试。 （4）你的ECL显色剂质量怎样？一定要选
入适量的一抗，置于 4℃ 冰箱中过夜。洗膜：将过夜杂交的膜从塑料袋中取出，投入含有足量体积 TBST 的洗膜盒中，于摇床上清洗，每次 10 分钟，连续 3 次。二抗杂交：处理步骤类似一抗杂交步骤，不同之处在于二抗杂交可在常温下，1 小时内完成。二抗比例控制在 1:2000～1:5000。洗膜：见步骤 7。显影：将膜平放于干燥的平面上，将新鲜配置好的 ECL Reagent 滴加到有铅笔记号标注的膜面上，反应 5 分钟后用滤纸在膜的边缘尽量吸去多余的 ECL Reagent，将膜放到化学发光仪中收集信号
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