- ￥1152
- Solarbio
- 北京
- SA0025
- 2025年11月26日
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-20度
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- 英文名：
SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit
- 库存：
预定
- 供应商：
Solarbio
- 规格：
100-200T
产品内容：
封闭液（5% BSA） 10ml
Bio-羊抗兔IgG浓缩液 100ul
SABC-FITC浓缩液 100ul
SABC-POD浓缩液 100ul
稀释液 30ml
20×DAB显色液A 1ml
20×DAB显色液B 1ml
抗荧光衰减封片剂 10ml
保存： 如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，稀释液, 20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2-8℃以方便使用。
产品简介： 本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验. DAB及FITC显色。 SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
操作步骤:（以石蜡切片热修复为例）1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶（如果FITC，可省掉此步）。蒸馏水洗3次。 2. 热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。5. 根据使用量，用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。8. 根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。9. DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B ，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。10. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片： 常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2（如果用FITC，刚可省掉此步）处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。对于冰冻切片： 固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。
注意事项： 如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。 如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。 因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。
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文献和实验两者所用的显色系统也不同。SP法与SAP法的其他染色步骤同SABC法。 Envision TM SVStemS 该法是近几年在国内推广使用的一种方法，它的原理是将多个抗鼠和抗兔IgG分子与辣根过氧化物酶结合形成聚合物。以代替传统方法的二抗和三抗，直接与特异性第一抗体结合，从而放大了抗原抗体结合的信号，使检测变得简单而且敏感性增加。经DAB显色即可完成染色，其他染色步骤与SABC法相同。 Envision TM SVStemS原理示意图
说明：这是我今年做免疫组化的一点体会，奉献给大家。如有不正确的地方，敬请指教。同时，这也是我应付《免疫组化》的一份作业，老师给了我85分。斑竹呀，如果觉得有点用，就请鼓励一下，加点分吧！:D:D:D应用SABC法进行免疫组化染色的体会SABC（Strept Actividin-Biotin Complex）法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。由于该方法中的链霉亲和素的等电点接近中性（pH=6.0-6.5），对组织和细胞的吸附性特别低，因而具有较低的背景。它的步骤
FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy
