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50支/包
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文献和实验后,吸出细胞悬液; 4. 计数细胞,并用培养液调节细胞密度; 5. 将细胞以3×106 个/ml的密度接种于培养瓶中,于37℃、5%CO2 培养箱中培养。24h后换液,除去未贴壁的细胞及细胞碎片。以后每隔2—3d换液一次; 6. 待细胞汇合成片后,用0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA(1:1,V/V)混合消化液消化细胞,进行继代培养; 7. 如果要冻存细胞,以便长期使用,可以将成片细胞经消化分散后,悬浮于保存液中,调节细胞密度至1.5×106 —2.0×106 个/ml。每管1—
为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。 许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值(A1%1cm)有文献数据可查,根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与(A1%1cm)值(即蛋白质溶液浓度为1%,光径为1cm时的光吸收值)的关系。文献值A1%1cm,称为百分吸收系数或比吸收系数。 蛋白质浓度 = (A280′10 )/ A1%1cm,280nm (mg/ml) (q 1%浓度 10mg/ml) 例:牛血清清蛋白 : A1%1cm=6.3 (280nm
1.0 ml 6 well plate 962 3.0-8.0×10 2.0 ml 35mm 962 3.0-8.0×10 2.0 ml 60mm 2827 1.0-2.5×10 6.0 ml
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