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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 英文名:
Competent Cell Preparation And Transformation Kit For Saccharomyces Cerevisiae
- 保质期:
保存在-20℃,1年。
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- 保存条件:
保存在-20℃,1年。
- 规格:
250T/50T
| 规格: | 250T | 产品价格: | ¥1780.00 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥680.00 |
Solarbio生产的酿酒酵母感受态细胞制备及转化试剂盒(Competent Cell Preparation and Transformation Kit for Saccharomyces Cerevisiae)是一种快速、便捷、高效地制备高活性酿酒酵母感受态细胞并进行质粒转化的试剂盒。本试剂盒提供了感受态制备和转化除培养基以外所需的几乎全部试剂,无须稀释和配制,操作简单快捷,酵母完成培养后30分钟内即可完成感受态细胞的制备,可以用于酵母杂交实验以及酵母文库构建实验。进行酿酒酵母转化时,使用试剂盒中提供的缓冲溶液培养酵母细胞,使其处于待转化状态,然后将感受态细胞与待转化的质粒DNA和Carrier DNA混合再使用转化溶液孵育进行转化。Carrier DNA是短的线形单链DNA,在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中能促进质粒进入酵母细胞,还可以保护质粒免于被DNA酶降解。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞: 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用 RM 符号表示。转化方法:电击
)的处理后。 细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞 (Compenent cells).进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状.将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(Transformant,即带有异源DNA分子的受体细胞).目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl(KCl)法,RbCl(KCl)法制备的感受态细胞转化效率较高,但CaCl2 法简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求
1、毕氏酵母氯化锂转化法(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注:醋酸锂对毕氏酵母无效,仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris
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