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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
保存在-20℃(酶附件),常温(RT)(其它试剂),1年。
- 保质期:
保存在-20℃(酶附件),常温(RT)(其它试剂),1年。
- 英文名:
Yeast Genomic DNA Extraction Maxi Kit
- 库存:
999
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- 规格:
10T
操作步骤(仅供参考):
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签(每瓶漂洗液需要单独加入45mL无水乙醇)。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、在离心管中收集酵母细胞20-40mL(不超过109 cells),10000rpm离心1min,尽量吸除上清。
2、酵母细胞壁的破除:向酵母菌体中加入9mL山梨醇Buffer。充分悬浮菌体,加入600μL酵母破壁酶和100μL巯基还原剂,充分混匀。30℃处理1-2h,期间可颠倒离心管混匀数次。
3、10000rpm离心lmin,弃上清,收集沉淀。
4、向沉淀中加入5mL溶液A,充分悬浮沉淀,向悬浮液中加入50μL的RNase A,充分颠倒混匀,室温放置10min。
5、加入500μL的蛋白酶K,充分颠倒混匀。65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。
6、加入5mL溶液B,再加入5mL无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。
7、10000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入7mL漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。10000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
9、向吸附柱中加入7mL漂洗液,10000rpm离心l min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
10、10000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加1-2mL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,10000rpm离心l min。
12、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,10000rpm离心2 min,即可得到高质量的基因组DNA。
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文献和实验以下操作按照天根产品 DP305 植物基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 植物叶片 研钵 液氮2. 无水乙醇 巯基乙醇3. 移液器及配套无菌枪头(10 μl, 200 μl ,1ml),1.5 ml离心管4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,实验准备-试剂盒准备1:使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。实验准备-试剂盒准备2:准备实验时,将缓冲
; 2)出汁率:300~400 mL/kg; 3)推荐榨汁机:手摇式碾磨榨汁机; 4)果实质量参考:70 g 左右果实(不包括果皮),榨汁处理后得到 20~30 mL 原汁,按推荐试剂盒进行前处理后,浓缩 50 倍,最终可获得 400 μL 左右的植物囊泡。 5)处理: ① 薄皮果实洗净后,将果实切小块直接榨汁; ② 厚皮果实(如柠檬)的果皮出汁量较低且含有大量杂质,需要去皮后切小块再榨汁。 6)提取试剂盒推荐:宇玫博 UR5220 植物囊泡提取纯化试剂盒(多汁植物)。 2. 花/叶:如玫瑰、芦荟
、Ribonuclease H(核糖核酸酶H) 22、Nova in vitro Transcription KitⅠ(Nova 体外转录试剂盒) 23、DL2000 DNA Marker 24、DL5000 DNA Marker 25、DL10000 DNA Marker 26、Lambda DNA/ Hind III DNA Marker 27、QuickSpin Blood Genomic DNA Mini Kit(血液基因组DNA小量提取试剂盒) 28、QuickSpin Tissue/Cell
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