1×无蛋白快速封闭液

【求助】请教关于蛋白和NC膜结合的问题

glacierna6 如果是做western blot，有个电转的过程，蛋白可以和NC膜比较牢固的结合。 但是如果我前面步骤都不做，直接点二抗到NC膜上呢，放置10分钟，能否牢固结合？ 如果加封闭液，用摇床晃或者不晃，会不会把二抗从膜上晃下来（假设是没有饱和结合的）？ 谢谢高人指点！ shb-sangon 直接点二抗到NC膜上(膜下放置滤纸），放置10分钟，自然风干，能牢固结合。 用无蛋白封闭液

免疫荧光实验指南

。 抗体孵育 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4 ℃ 孵育过夜。 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min。 注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。 固定拍照 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI。 用吸水

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）

缓冲液配制该溶液，使其浓度为10mg/mL,用0.5mmol/L的NaHCO3调pH值为8.0。取上述溶液1mL，加9mL甘油，混匀。PI/antifade溶液：PI与antifade原液按体积比1:9比例充分混匀，－20oC保存备用。8）DAPI/antifade溶液：用去离子水配制1mL/mg DAPI储存液，按体积比1:300，以antifade溶液稀释成工作液。9）封闭液I：体积分数5％BSA 3mL，20×SSC 1mL,ddH2O 1mL,Tween20 5µL混合。10）封闭液II：体积分数5％