GST-pulldown 检测实验服务

GST-pulldown 实验服务说明

一、技术原理与适用场景

1. 验证两个已知蛋白之间是否存在直接相互作用；
2. 筛选可与已知蛋白结合的未知互作蛋白。

二、配套蛋白表达纯化体系

1. 大肠杆菌表达系统

• 表达载体构建：交付重组质粒测序报告，周期 1-2 周
• 转化大肠杆菌及小量检测：交付 SDS-PAGE 检测图，周期 2-3 周
• 扩大表达 1mg 及蛋白纯化：交付 1mg 纯品蛋白、SDS-PAGE 检测图，周期 2-3 周

2. 酵母表达系统

• 表达载体构建：交付重组质粒测序报告，周期 1-2 周
• 转化及小量测试：交付 SDS-PAGE 检测图，周期 2-3 周
• 扩大表达 1mg 及蛋白纯化：交付 1mg 纯品蛋白、SDS-PAGE 检测图，周期 2-3 周

3. 真核细胞表达系统

• 表达载体构建、转染及小量表达：交付 SDS-PAGE 检测图，周期 2-3 周
• 1L 细胞扩大培养及纯化：交付 100μg 以上纯化蛋白，周期 3-4 周
   
  其他类型表达系统可另行咨询。

三、GST-pulldown 完整实验内容与周期

1. 实验内容：pull down 前 WB 验证、pull down 下拉实验、pull down 后诱饵蛋白 WB 验证；设置对照组、实验组，包含 GST 标签蛋白、His 标签蛋白共 4 个泳道检测
2. 实验周期：2 周

四、标准实验流程

五、客户样本 / 材料提供要求

1. 无模板质粒，需合成基因并表达：提供目的基因序列；
2. 自带模板质粒做蛋白表达：质粒浓度≥20 ng/µL，总量≥10 µL，干冰运输；提供甘油菌需标注菌种名称，总量≥50 µL，干冰运输；
3. 自带纯化完成的诱饵蛋白、互作蛋白：蛋白浓度≥1µg/µl，体积≥200µl，注明蛋白标签类型与分子量。

六、交付全套实验资料

1. 实验交接单、蛋白互作实验送样单、完整 GST-pulldown 实验报告；
2. 蛋白纯化考染凝胶图、pulldown WB 原始成像图与结果图；
3. 配套检测图谱示例：
   • 大肠杆菌镍柱纯化蛋白电泳条带图；
   • pulldown 检测 WB 图，含 input、GST、His-A、GST-B 各组条带，分别采用 His-Tag、GST-Tag 抗体曝光，标注蛋白分子量（His-A：30 kDa，GST-B：41 kDa）。

七、配套实验平台

八、使用范围