普通蛋白整膜 WB 检测实验服务

WB 为何又翻车？

最近师妹开始做 WB 实验了，但是一天又一天重复做，却次次结果不理想。除了没有拿到组会可以汇报的条带外，师妹集齐了所有奇奇怪怪的条带：微笑带，皱眉带，拖尾带，甚至没有条带…… 师妹也因此对我发出了灵魂拷问：「为什么 WB 实验这么容易翻车？」 虽然 WB 是一类基础实验，但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐：从配置蛋白胶开始，到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育，一整套流程下来花费 1～2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错，就会导致实验

WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办？

随机性和不可预测性，无法真实的体现样品中蛋白的表达情况。 除以上问题外，核酸残团的存在还会导致 WB 内参蛋白跑不齐、磷酸化蛋白难以检测或趋势不正确，WB 背景高等众多问题。所以想得到真实的 WB 结果，必须要在样品制备过程中去除这些粘稠物。 如何踢开样品制备中的这块「绊脚石」？ 1. 超声破碎 超声波的能量可以破坏蛋白复合物，切割染色质，从而改善样品粘稠状态。但该方法存在一些弊端，如： 1）经过超声波的处理，样品会产生很多泡沫，影响

做了这么多的 WB，你知道化学发光和荧光可以一起检测吗？

了 BMMSCs 中确实发生了硫巯基化。 为了定量描述硫巯基化程度，作者还同时使用化学发光法进行了 western blot，检测出靶蛋白的总量作为 Input，对数据进行归一化（normalization）处理，结果如下： 图 2. 用马来酰亚胺分析 BMMSCs 中 TRPV3 和 TRPM4 钙通道的巯基化作用。NaHS- 和 DTT 处理的 BMMSCs 中，TRPV3 蛋白的绿色荧光降低。 实验原理巧妙，但操作步骤只需要在传统的 IP-WB 基础上稍作调整： 1. 荧光标记：AF488-C5