稳转株WB水平验证

你已经是个成熟的细胞了，该学会自己做实验了

就比较困难，某种程度上干扰更为重要，想说明一个基因对于一个事件是必须的，只有把它拿掉，事件终止（或程度减弱），才比较有说服力。但是，如果你的基因在细胞中基础表达本身就不高的话，还是有必要来选择过表达实验来对其表型进行验证的，否则实验会受到质疑。关于下调基因表达，一般来说干扰稳转株能满足实验所需。但是，干扰稳转株不能控制 shRNA 插入染色体的位置，染色体上的 shRNA 有时会丢失，另外 shRNA 也有脱靶效应，可能干扰了其他未知基因。还有就是，shRNA 是与目的基因的 mRNA 作用而使

如何做好 WB 方案设计？你需要了解这些信息

设计 1. 首先明确实验目的，为什么要做这个 WB 实验？要验证哪些问题？ 例如：是想验证目标蛋白的表达情况？还是要验证目标蛋白在细胞几个不同组分中表达差异？或者是进行蛋白定位、蛋白转运过程的研究？ 2. 明确好实验目的后，根据样品种类，目标蛋白表达量及细胞定位情况，确定蛋白提取方案。 例如： * 目标蛋白表达量正常，但小分子量蛋白或是膜蛋白这类目标蛋白很难提取，使用常用的 RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液进行提取时，容易丢失

做了这么多的 WB，你知道化学发光和荧光可以一起检测吗？

2+ 通道硫巯基化，来维持间充质干细胞的功能和骨稳态。骨髓间充质干细胞产生H2S协助调节自我更新和成骨分化。H2S 缺乏会导致 Ca2+TRP 通道上多个半光氨酸残基的硫巯基化程度降低，产生钙内流异常。异常的钙内流会下调 PKC/Erk- 介导的 Wnt/β-catenin 信号，从而影响到成骨分化。结果提示通过无毒供体恢复 H2S 水平，可以治疗 H2S 缺乏导致的骨质疏松症等疾病。 有趣的事情来了。在验证 H2S 通过 Ca2+ 通道的巯基化调节钙内流时，研究人员将 BMMSCs 分成了 2 组