稳转株WB水平验证

当抗体验证图也开始被质疑：做 WB 的人，真正需要守住的是第一张原图

内容摘要： 商业抗体验证图像出现大规模争议，并不等于相关抗体都已被证实无效。对真正做 Western Blot（WB）的人来说，更现实的问题是：当一次实验失败时，手里的记录能否帮助自己判断，问题出在抗体、样品、转膜、曝光，还是后处理？本文提供一份新抗体预验证与原图留存清单，并说明 Touch Imager 与数据钢印如何在图像采集和数据追溯环节提供支持。 事实边界： 本文依据截至 2026 年 8 月 27 日可查的公开资料撰写。文中提及的调查数据库属于持续更新的线索记录，其中被标记的图像不能

你已经是个成熟的细胞了，该学会自己做实验了

就比较困难，某种程度上干扰更为重要，想说明一个基因对于一个事件是必须的，只有把它拿掉，事件终止（或程度减弱），才比较有说服力。但是，如果你的基因在细胞中基础表达本身就不高的话，还是有必要来选择过表达实验来对其表型进行验证的，否则实验会受到质疑。关于下调基因表达，一般来说干扰稳转株能满足实验所需。但是，干扰稳转株不能控制 shRNA 插入染色体的位置，染色体上的 shRNA 有时会丢失，另外 shRNA 也有脱靶效应，可能干扰了其他未知基因。还有就是，shRNA 是与目的基因的 mRNA 作用而使

如何做好 WB 方案设计？你需要了解这些信息

设计 1. 首先明确实验目的，为什么要做这个 WB 实验？要验证哪些问题？ 例如：是想验证目标蛋白的表达情况？还是要验证目标蛋白在细胞几个不同组分中表达差异？或者是进行蛋白定位、蛋白转运过程的研究？ 2. 明确好实验目的后，根据样品种类，目标蛋白表达量及细胞定位情况，确定蛋白提取方案。 例如： * 目标蛋白表达量正常，但小分子量蛋白或是膜蛋白这类目标蛋白很难提取，使用常用的 RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液进行提取时，容易丢失