肉毒杆菌F型（CB-F）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

肉毒杆菌F型（CB-F）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

基本信息
产品名称：肉毒杆菌F型（CB-F）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Clostridium botulinum Type F (CB-F) Nucleic Acid Detection Kit (qPCR)
规格：50T / 盒
品牌：烜雅生物
有效期：12 个月
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（建议≤5 次）
适用仪器：ABI7500、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等主流荧光定量 PCR 仪
用途：科研用，不用于临床诊断

预期用途
适用于肉毒杆菌 F 型（CB-F）特异性 DNA 的定性 / 定量检测，辅助肉毒杆菌 F 型感染或污染的溯源与排查。
食品样本：水产品、腌制品、罐头、肉制品等
临床样本：粪便、呕吐物、血液、组织（肝 / 脾 / 肺）等
环境样本：水体、土壤、拭子等

检验原理
采用TaqMan 探针法实时荧光 PCR（qPCR）技术：
针对肉毒杆菌 F 型神经毒素基因（botF）保守区设计特异性引物与 FAM 标记探针。
PCR 扩增时，Taq 酶 5’→3’外切酶活性降解探针，释放 FAM 荧光信号。
荧光信号随扩增循环指数增长，仪器实时监测并记录Ct 值，据此判定样本中靶核酸存在与否及含量。

试剂盒组成
组分    规格    说明
反应液（2×）    1.0 mL×1 管    含 PCR 缓冲液、dNTPs、引物、FAM 探针
酶液    50 μL×1 管    热启动 Taq DNA 聚合酶
核酸提取液    1.5 mL×2 管    用于样本 DNA 提取
阳性质控品    50 μL×1 管    含肉毒杆菌 F 型靶序列
阴性质控品    250 μL×1 管    无核酸酶水
说明书    1 份    操作与判读指南

操作步骤
样本处理
食品 / 环境：25g 样本 + 225mL 缓冲液，厌氧增菌（35–37℃，12–48h），取 1mL 菌液提取 DNA。
临床：粪便取粘液脓血，血液用抗凝血，组织匀浆离心取上清，磁珠 / 离心柱法提取 DNA。
PCR 体系配制（25μL / 反应）
反应液（2×）：19 μL
酶液：1 μL
模板 DNA / 对照：5 μL
冰上操作，离心混匀。
扩增程序（FAM 通道采集荧光）
预变性：95℃，2 min（1 循环）
扩增：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（45 循环，60℃收集信号）
结果判读
阳性：Ct≤40，扩增曲线呈指数增长。
阴性：无 Ct 或曲线平直。
可疑：40＜Ct≤45，建议重复检测；仍可疑则阴性。
质控标准：阴性对照无 Ct；阳性对照 Ct≤32。

产品特点
高灵敏特异：靶向 botF 基因，探针法特异性强，低拷贝可检。
快速省时：全程约 2h，增菌后可直接检测，适合批量筛查。
操作简便：预混试剂即开即用，仅需加模板，减少人为误差。
防污染：单管闭管扩增，降低气溶胶污染风险。
兼容广：适配主流 qPCR 仪器，灵活适配不同实验室。

注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、扩增区物理隔离，防止交叉污染。
避免反复冻融：试剂融化后混匀（勿剧烈振荡），分装保存减少冻融次数。
仅科研用：结果不可作为临床诊断依据，仅供实验室研究与污染监测。