单自发光 + IF双标扫描 单组外源荧光搭配IF双标记共定位

一、服务简介

技术痛点与方案原理

二、服务核心优势

1. 前置离体组织荧光成像，成像结果与活体成像数据保持一致，可完成荧光灰度值定性、双重定量分析，快速判定动物造模是否成功；
2. 首轮全景扫描完整留存标记自发荧光原始信号，大幅降低后续多轮蛋白标记过程中荧光淬灭风险；
3. 搭配专用荧光去除设备清除组织背景与残留标记荧光，提升抗体标记特异性；配套 TSA 信号放大技术，阳性信号增强，检测灵敏度高，同源、异源一抗均可使用；
4. 图像融合以 DAPI 通道为对齐基准，采用 0.5 像素高精度重合算法匹配每一轮切片扫描图像，融合画面完整、对位精准；
5. 配套轻量化图像浏览分析工具，普通办公电脑即可读取全景图像，一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度、阳性面积等量化参数，无需高端服务器硬件。

三、完整标准实验流程

前置样本与自发荧光采集流程

1. 构建荧光标记动物模型，完成活体成像验证；
2. 组织取材，纱布吸干表面水分，液氮速冻 15s，置于 - 80℃避光环境保存；
3. 组织短时间固定（24h 以内），荧光成像设备采集离体组织荧光图像并完成灰度定量检测；
4. 制备冰冻切片，DAPI 复染封片，高清全景扫描，完整留存单组标记自发荧光原始图像。

两种靶蛋白多轮免疫荧光操作流程

1. 去除切片盖玻片；
2. 抗原修复处理；
3. 荧光淬灭设备清除标记自发荧光与组织背景自发荧光；
4. 内源性过氧化物酶封闭；
5. 血清封闭；
6. 第一种一抗孵育；
7. HRP 标记二抗孵育；
8. iF488-TSA 荧光标记；
9. 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗；
10. 再次血清封闭，开展第二种靶蛋白标记：一抗孵育→HRP 二抗→iF647-TSA 标记；
11. DAPI 复染细胞核并封片，高清全景扫描；
12. 去除盖玻片，抗体洗脱液清洗切片；
13. 专用设备彻底清除切片残留荧光基团；
14. 软件对自发荧光、两种靶蛋白所有分层扫描图像统一高精度融合；
15. 开展共定位、阳性率、阳性面积等数据分析。

四、样本保存与运输规范

五、样本送检注意事项

1. 送检时需完整备注标记自发荧光的类型、激发波长与发射波长；成像设备有固定滤光波段范围，荧光波长不在区间内无法完成成像；
2. 切片前组织仅可短时间固定（24h 内），经固定后的样本不能再开展其他分子实验；如需多种检测项目，提前分切、分开保存组织；
3. 若标记荧光药物可溶于水或有机试剂，需提前告知，避免固定溶解荧光物质造成实验失败；
4. 脑、脊髓等神经系统样本，后续需检测 IBA-1 蛋白时，取材后立即固定，3 日内送检；固定不充分会造成抗体标记失败，固定时间过长会产生背景荧光干扰自发荧光观测。

六、交付成果